【摘 要】
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研究Islet-1对干细胞特化心肌样细胞的调控作用。用PCR获取目的基因,将目的基因与pLenO-WPI载体连接,选取阳性质粒,与辅助质粒共同感染293T细胞生产出慢病毒载体。感染C3H10T
【机 构】
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重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所; 重庆医科大学附属儿童医院心脏内科;
【基金项目】
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国家自然科学基金(30973219);重庆市自然科学基金重点项目(CSTC,2009BA5084)
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研究Islet-1对干细胞特化心肌样细胞的调控作用。用PCR获取目的基因,将目的基因与pLenO-WPI载体连接,选取阳性质粒,与辅助质粒共同感染293T细胞生产出慢病毒载体。感染C3H10T1/2细胞,实时荧光定量PCR及Western blot检测Islet-1和心肌、肝脏、骨骼及神经各系统相关标志物的表达,免疫荧光检测心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达部位。PCR及测序显示目的片段正确插入,实验组有Islet-1表达;心肌早期发育相关基因GATA-4、MEF2C、NKx2.5在检测到荧光蛋白1周后升高,2周到达高峰,3周后可检测到心肌特异性蛋白cTnT(0.582±0.0576),其时序性表达呈随时间增强趋势;cTnT表达于胞质;肝脏系统特异性标志AFP及ALB、骨骼系统特异性标志BGP及BALP、神经系统特异性标志Nestin及GFAP均未表达。Islet-1具有特异性促进干细胞向心肌样细胞分化的作用。
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