【摘 要】
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采用SMART技术构建了小尾寒羊卵巢组织cDNA文库,应用DDRT-PCR技术对小尾寒羊和滩羊卵巢组织影响排卵率的mRNA差异表达进行了研究.所建文库的原始容量为5×106,重组率达到96﹪以上,扩增后库的滴度为1×109pfu/ml,文库中插入片段大小分布在0.5～5.0kb之间,平均长度为1.5kb左右.随机挑选了380个样品进行测序,共测序968次.通过拼接得到338个ESTs,这些ESTs
【机 构】
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中国农业科学院畜牧研究所,北京,100094 国家水产品质量监督检验中心,青岛,266007
【出 处】
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第十三次全国动物遗传育种学术讨论会
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采用SMART技术构建了小尾寒羊卵巢组织cDNA文库,应用DDRT-PCR技术对小尾寒羊和滩羊卵巢组织影响排卵率的mRNA差异表达进行了研究.所建文库的原始容量为5×106,重组率达到96﹪以上,扩增后库的滴度为1×109pfu/ml,文库中插入片段大小分布在0.5～5.0kb之间,平均长度为1.5kb左右.随机挑选了380个样品进行测序,共测序968次.通过拼接得到338个ESTs,这些ESTs均具有3端Poly(A)结构,测序的成功率为88.9﹪.通过聚类分析将所有ESTs归为191个contig,其中大于2kb的contig有7个,介于2kb和1kb中间的有69个,它们共占contig总数的39.8﹪.191个ESTs序列中在GenBank和EMBL中未找到匹配同源序列的ESTs为89个;88个EST在人类、牛及鼠等物种中可以找到同源序列,且功能明确,其中只有9个在GenBank的绵羊数据库中可以找到同源序列.通过应用三条锚定引物和八条随机引物,共计24个引物组合,并经过反向Northern杂交印证排除假阳性,最终获得24条小尾寒羊卵巢组织差异表达条带.通过BLAST对这些EST进行同源序列搜索,结果有5个EST以多拷贝形式存在,13个EST为单拷贝.18个EST中检索到有编码区且功能已知同源序列的EST有6条,检索到同源序列但无编码区或功能未知的EST有3条,没有匹配序列的新EST有9条.进一步分析表明,这些EST分别代表NOS2、tensin、TCRA、CDKN1A、ESR1、ACTB等基因,显然这些基因在小尾寒羊中是特异表达的.
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