【摘 要】
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猪链球菌2型溶血素(SLY)蛋白,其中SLY属于被巯基激活的细胞毒素家族,既膜损伤类毒素,这类毒素作用是通过酶的水解活性和孔的形成来实现的,具有破坏原核细胞的胞浆膜、胞外基质.这种损伤不仅直接造成细胞膜的破裂,还有利于细菌的扩散.鉴于SLY蛋白在链球菌病感染中扮演着如此重要的角色,本实验对SLY蛋白进行了以下研究,克隆表达SLY蛋白,以表达蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,制备SLY单抗,获得能稳
【机 构】
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华中农业大学动物动物医学院预防兽医学实验室,武汉,湖北 430070
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会
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猪链球菌2型溶血素(SLY)蛋白,其中SLY属于被巯基激活的细胞毒素家族,既膜损伤类毒素,这类毒素作用是通过酶的水解活性和孔的形成来实现的,具有破坏原核细胞的胞浆膜、胞外基质.这种损伤不仅直接造成细胞膜的破裂,还有利于细菌的扩散.鉴于SLY蛋白在链球菌病感染中扮演着如此重要的角色,本实验对SLY蛋白进行了以下研究,克隆表达SLY蛋白,以表达蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,制备SLY单抗,获得能稳定分泌抗SLY蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2株,单抗能特异性地抑制溶血素溶解红细胞能力,通过免疫组化反应单抗能特异性的识别蛛网膜下腔的2型猪链球菌溶血素抗原.为获得SS2 SLY单抗的抗原表位,用纯化的单抗筛选噬菌体随机12肽库,对15个克隆进行ELISA验证,获得12个阳性克隆,DNA序列分析表明这12个克隆具有"W-P-WD"的相识序列,位于SLY蛋白氨基酸序列的453-459位子上,形成的是一个线性表位.并对抗原表位的氨基酸序列进行逐一缺失,验证其缺失后的活性.
其他文献
用PCR方法从胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清1型参考株259的基因组DNA中,扩增约954bp的apxIA基因片段,分别构建大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1/apxIA和毕赤酵母表达栽体pPICzαA/apxIA.对目的基因密码子偏好性进行分析,发现其中有4个大肠杆菌稀有密码子,占1.2％:有49个毕赤酵母稀有密码子,占15.4％.利用所构建的大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1/apxIA和毕赤
apxIV是胸膜肺炎放线杆菌的一种RTX毒素,为探究其在胸膜肺炎杆菌致病过程中的作用,以血清7型APPHB04为亲本菌株,通过接合转移和负向筛选方法,构建了一株apxIV基因缺失突变株.通过PCR、序列分析、Southernblot分析及遗传稳定性分析等实验证明,突变株构建是成功的.对突变株生物学特性进行初步研究,发现突变株与亲本菌株相比,体外生长速度未发生明显变化,对小鼠的致病力有所降低.结果表
通过接合转移和SacB负向筛选的方法,我们以本地分离的血清1型胸膜肺炎放线杆菌SLW01为素本菌,缺失毒素ApxI和ApxII的激活因子apxIC和apxIIC,构建不含标记的胸膜肺炎放线杆菌双基因缺失株SLW03(△apxIC/AapxIIC).研究表明,双缺失突变株失去溶血活性,但能分泌具有免疫原性的ApxIA和ApxIIA.突变株的生长能力未受影响,对Balb/C小鼠的毒力显著降低.以SLW
猪链球菌二型是一种新发现的人兽共患传染病,给国外的养猪业带来巨大的损失,并引起了高度关注,本文较为完整的综述了国内外学者对该菌的研究成果,其中主要包括毒力因子的发现,猪链球二菌的防治等.
以胸膜肺交放线杆菌(APP)apxIVA和猪圆环病毒II型(PCV2)ORF2为靶基因,根据其核苷酸序列分别设计高度特异性的引物和标记不同荧光报告基团的TaqMan探针,扩增片段大小分别为132bp和169bp,将其克隆到pMD-18T载体中,作为阳性标准品.经荧光PCR扩增获得两务标准曲线,建立了检测APP和PCV2的双重荧光PCR方法.该法可在同一反应体系中同时对APP和PCV2进行定量检测,
根据GenBank已登录的猪链球菌9型(SS9)cps9H基因保守部分序列设计合成引物和TaqMan荧光探针,以定量的10倍系列稀释含cps9H部分基因的T载体重组质粒(pGEX-T-cps9H)为标准品,进行荧光定量PCR扩增并制作了标准曲线,经对荧光定量PCR的反应条件进行优化,建立了SS9型的TaqMan 荧光定量PCR检测方法(Taqman FQ-PCR);对所建立的FQ-PCR检测方法进
利用PCR的方法,从猪链球菌2型四川资阳分离株449-1扩增出sao基因,克隆到pMD18-T载体中,构建质粒pMD18T-sao.以Sal I和BamH I从pMD18T-sao中切下目的sao基因片段并克隆到质柱pMAL-p2X中,构建重组表达质粒pMALp2X-sad,转在宿主菌TBI中进行诱导表达.sao基因经序列分析表明比GenBank报道序列AY864331少了270 bp;SDS-P
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为了研究猪链球菌2型基因组中毒力相关蛋白E(vapE)基因和基因岛4(PAI4)在细菌致病性中的作用,利用DNA同源重组的原理,通过温敏型自杀性重组质粒,以SS2中国流行强毒株458＃为研究时象,定点敲除SS2基因组中vapE和PAI4基因片段,分别构建了SS2 VapE缺失株(458＃△vapE)和SS2 PAI4缺失株(458＃APAI4).序列分析结果表明,所构建的458＃△vapE和458
利用PCR的方法,从猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)四川资阳分离株449-1扩增出cps2J基因,克隆到pMD18-T载体中,构建质粒pMD18T-cps2J.以SalI和BamHI从pMDl8T-cps2J中切下目的cps2J基因片段并克隆到质粒pMAL-p2X中,构建重组表达质粒pMALp2X-cps2J,转在宿主菌TB1中进行诱导表达.SDS-PAG