【摘 要】
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从患出血病草鱼体上分离出2个菌株,分别命名为wp3和zc1.传统分类学及16s rRNA基因鉴定为嗜水气单胞菌.对此2菌株的气溶素(aerolysin,aerA)基因和溶血素(hemolysin,hlyA)基因进行克隆、序列与结构分析.aerA和hlyA均为气单胞菌主要的毒力基因,具有溶血性和细胞肠毒性等相似的毒力作用.近年来此二个基因常被应用于菌株毒力的评定.aerA和hlyA基因的序列长分别为
【机 构】
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中国水产科学研究院珠江水产研究所,广州510380;上海海洋大学,上海201306 中国水产科学研
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从患出血病草鱼体上分离出2个菌株,分别命名为wp3和zc1.传统分类学及16s rRNA基因鉴定为嗜水气单胞菌.对此2菌株的气溶素(aerolysin,aerA)基因和溶血素(hemolysin,hlyA)基因进行克隆、序列与结构分析.aerA和hlyA均为气单胞菌主要的毒力基因,具有溶血性和细胞肠毒性等相似的毒力作用.近年来此二个基因常被应用于菌株毒力的评定.aerA和hlyA基因的序列长分别为1392bp和2122bp,ORF各编码493aa和621aa.序列分析显示这二个基因只有46.7％的同源性.Blast分析显示,hlyA基因和GenBank上的AY442273、U81555和AF146599等序列具有较高的同源性(94.7％～99.7％),而aerA基因与已登录的aerA基因以及一些hlyA序列(DQ408263、DQ302123和DQ302122等)具有较高的同源性(94％～99.6％).对与aerA基因同源性较高的这些hlyA序列用PfamHMMs在线分析系统进行结构域预测(http：//pfam.sanger.ac.uk/search),发现它们均具有APT(Aerolysin/pertussis toxin domain)结构域和气溶素结构域,说明它们实际上应是aerA基因,只是命名上与hlyA基因混淆.aerA和hlyA蛋白结构域预测,显示气溶素基因具有能与靶细胞表面特异性受体结合的ATP结构域,该结构域能促进气溶素与细胞膜受体结合,并使气溶素转化成为插入的状态,导致产生分散的细胞膜通道,使细胞渗透压升高并最终裂解；溶血素有一个N端,与三段β-折叠的溶血素结构域组成一个"门闩",此为水溶性跨膜毒素的特征.用DNAstar软件预测aerA和hlyA的抗原性,显示它们分别有14个和12个区域指标(即Jameson-Wolf抗原性指标)达到或超过1.7,说明两个基因均具有很好的抗原性……
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