【摘 要】
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血吸虫对终末宿主的感染及寄生的过程与其逃避补体杀伤作用有关,研究其分子机制对探索血吸虫与宿主相互作用有重要意义.血吸虫C1qBP蛋白可能具有与宿主C1q补体成分结合的能力,推测其在血吸虫逃避补体杀伤作用中发挥重要作用.据此利用PCR技术扩增了日本血吸虫C1qBP基因片段,测序分析表明该基因ORF为729bp.分析表明,SjC1BP基因编码242个氨基酸,理论分子量为27.58kD,理论等电点为4.
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室,上海 200241 中国农业科学院
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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血吸虫对终末宿主的感染及寄生的过程与其逃避补体杀伤作用有关,研究其分子机制对探索血吸虫与宿主相互作用有重要意义.血吸虫C1qBP蛋白可能具有与宿主C1q补体成分结合的能力,推测其在血吸虫逃避补体杀伤作用中发挥重要作用.据此利用PCR技术扩增了日本血吸虫C1qBP基因片段,测序分析表明该基因ORF为729bp.分析表明,SjC1BP基因编码242个氨基酸,理论分子量为27.58kD,理论等电点为4.728；利用SignalP预测显示SjC1BP不存在信号肽,TMHMM预测显示SjC1BP不存在跨膜区；二级结构分析表明,该多肽以无规则卷曲为主,SMART软件分析含有结构域为Pfarn-MAM33,可能为补体C1q结合位点.利用EcoRⅠ、Xho Ⅰ限制性内切酶将该片段亚克隆至pET-32a(+)构建重组表达质粒pET-32a(+)-C1qBP.重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导后获得表达,表达量在诱导后5h表达量较高.SDS-PAGE分析结果表明重组蛋白以包涵体形式存在,但可溶解于8 mol/L尿素溶液中.在变性条件下用His-Bind亲和层析方法可纯化获得重组蛋白,分子量约为50kDa.将纯化的重组蛋白逐级用含不同浓度梯度尿素/PBS溶液透析,最后对PBS透析,可获得复性重组蛋白.应用重组蛋白rSjC1qBP免疫BALB/c小鼠,可诱导较高水平的特异性IgG抗体,Western-blot分析表明rSjC1qBP具有较好的免疫原性.结果为评估C1qBP分子作为抗血吸虫疫苗候选分子的潜力及研究SjC1qBP的生物学功能提供了基础.
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