【摘 要】
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目的 制备一个稳定表达新型荧光素酶的重组乙型肝炎病毒细胞系.方法 构建具有潮霉素(Hyg)抗性的载体质粒pTRE-HBV-S-Nluc,具有杀稻瘟菌素(Bsd)抗性的HBV辅助质粒pcDNA31 (-)Bsd-CH3142与载体质粒共转染HepG2TA2-7细胞[12],经新霉素(G418)、Bsd和Hyg共筛选,获得细胞克隆,进行一系列检测.结果 挑选48个细胞克隆,经检测,最终筛选出6个细胞株
【机 构】
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中国人民解放军白求恩国际和平医院传染肝病科 河北医科大学研究生学院
【出 处】
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第四届晋冀鲁豫肝病论坛暨2016年河南省医学会感染肝病学术年会
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目的 制备一个稳定表达新型荧光素酶的重组乙型肝炎病毒细胞系.方法 构建具有潮霉素(Hyg)抗性的载体质粒pTRE-HBV-S-Nluc,具有杀稻瘟菌素(Bsd)抗性的HBV辅助质粒pcDNA31 (-)Bsd-CH3142与载体质粒共转染HepG2TA2-7细胞[12],经新霉素(G418)、Bsd和Hyg共筛选,获得细胞克隆,进行一系列检测.结果 挑选48个细胞克隆,经检测,最终筛选出6个细胞株,具有较高荧光素酶和较高病毒载量,细胞培养上清液中荧光素酶的值分别为2.42×108、2.54×108、2.95×108、3.84×108、4.35×108、3.31×108,病毒定量分别为2.96×104、3.31×104、2.19×104、1.69×105、5.25×105、4.31×102拷贝/ml.结论 此细胞系能够大量制备重组HBV载体颗粒,并用荧光素酶容易检测,有助于HBV载体在基因治疗方面的应用和易感细胞系的筛选.
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