目的:分析目前甲氨蝶呤血药浓度测定的方法，寻找最常使用的分析方法及与该方法相对应的分析条件，为TDxFLx/TDx免疫分析仪配套试剂盒停产后提供可供选择的甲氨蝶呤血药浓度测定方法。 方法:通过CNKI查阅近十年有关甲氨蝶呤血药浓度测定方法的相关文献，对比、分析各测定方法的优缺点，并用Excel进行数据统计，发现最常应用的血药浓度测定方法，再对该方法的色谱条件进行讨论。 结果:在甲氨蝶呤的血药浓度测定方法中，59.09％采用高效液相色谱法，34.09％采用荧光偏振免疫分析法，其它方法仅占6.82％。不同高效液相色谱法的主要区别在于流动相、内标及沉淀剂等的选择。目前，甲氨蝶呤血药浓度测定最常用的流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液、乙腈-磷酸盐缓冲液(分别占36.36％、22.73％)，内标为甲硝唑(约占40％)，沉淀剂为高氯酸(约占64.71)。 结论:高效液相色谱法简便、快速、准确、灵敏，是目前应用最多的甲氨蝶呤血药浓度测定方法，可供医院及研究机构选择。