目的：建立鉴定硫酸依替米星的HPIC-ESI-MS2分析方法，对硫酸依替米星成品中的有关物质进行鉴定。 方法：利用宽pH范围的Gemini NX C18(4.6mmxl50mm，5μm)色谱柱，在碱性条件下，以[水-氨水-冰醋酸(96：3.6：0.4)]Ⅰ-甲醇(70：30)为流动相，直接分离各组分；并用HPLC-ESI-MS2检测样品中各组分，质谱条件：ESI离子源，离子源温度350□，雾化室压力50 psi，干燥气流速10 L/min，正离子检测方式；对有对照品的有关物质采用比对有关物质与对照品的色谱保留时间、准分子离子的质荷比及二级质谱方法进行鉴定，无对照品的有关物质，则是先通过解析庆大霉素Cla、小诺霉素、依替米星的二级质谱，对该类化合物的二级质谱裂解规律进行归纳，并以此推测未知新化合物进行结构，再用推测的结构对二级质谱进行解析，如所有的碎片离子均合理解释，表明推测合理。 结果：用建立新方法，从硫酸依替米星成品中主要检出19个有关物质，对其中3个为已知化合物，即庆大霉素Cla、小诺霉素和奈替米星和1个依替米星异构体进行了确证，另外10个有关物质的结构除部分取代基的取代未知不能肯定外也基本得到鉴定，其余5个有关物质提供了分子量和二级质谱信息；结果显示，硫酸依替米星样品中，有4个依替米星同分异构体、4个小诺霉素同分异构体、2个依替米星降解物、2个依替米星同系物。 结论：新建立的HPLC-ESI-MS2方法可用于该品种的有关物质的结构鉴定和定性分析，该方法为依替米星质量控制和工艺优化研究提供了可靠的分析手段。