【摘 要】
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目的:利用重组表达的BTV3-VP2蛋白制备的单克隆抗体,拟建立BTV3型特异性诊断方法。方法:从感染BTV3的BHK-21细胞上清提取病毒RNA,经RT-PCR扩增L2基因,并将该基因分别克隆至原核表达载体pMAL-C4X和真核表达供体质粒pFast-BacHTA载体上。获得的重组质粒分别用于原核和真核表达,从而获得VP2蛋白。以原核表达的重组VP2蛋白作为免疫原免疫5-6周龄BALB/c小鼠,
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,哈尔滨150001
【出 处】
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2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会
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目的:利用重组表达的BTV3-VP2蛋白制备的单克隆抗体,拟建立BTV3型特异性诊断方法。方法:从感染BTV3的BHK-21细胞上清提取病毒RNA,经RT-PCR扩增L2基因,并将该基因分别克隆至原核表达载体pMAL-C4X和真核表达供体质粒pFast-BacHTA载体上。获得的重组质粒分别用于原核和真核表达,从而获得VP2蛋白。以原核表达的重组VP2蛋白作为免疫原免疫5-6周龄BALB/c小鼠,通过体外细胞融合技术将SP2/0骨髓瘤细胞与免疫后BALB/c小鼠的脾细胞进行融合。以真核表达的重组VP2蛋白为检测抗原,通过间接ELISA方法筛选出2株能稳定分泌VP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。结果:已获得2株能稳定分泌VP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。结论:上述结果有利于进一步了解BTV8 VP2蛋白的抗原结构及其在免疫应答中的作用,为中国BTV3的鉴别诊断方法的建立奠定了基础,并可采用PepScan技术进行抗原表位分析,深入研究蛋白质的抗原表位对于疾病的诊断、治疗、疫苗的开发等具有重要的意义。
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