天竺黄炮制冰片对心肌细胞毒性损伤及增效机制研究

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【目的】研究中药药对"天竺黄"与"冰片"配伍使用后对新生SD大鼠乳鼠心肌细胞毒性损伤及其增效机制。【材料和方法】用蒙医传统炮制方法天竺黄炮制合成冰片。以原代培养的新生SD大鼠乳鼠心肌细胞为对象研究制冰片、冰片对心肌原代细胞的毒性损伤;应用0.25%的胰酶和0.125%Ⅱ型胶原酶各2.5 mL磁力搅拌消化心脏组织8次(1000 r·min-1,3537℃),前2次每次5min,后6次每次8 min,然后加入含15%小牛血清的DMEM终止消化,1 000 r·min-1离心5 min,弃上清,将各次离心所得的细胞沉淀合并,加入DMEM制成悬液,计数后接种6孔板。将6孔板置于37℃培养箱中静置1 h后,上皮细胞及成纤维细胞将贴附于孔板表面,心肌细胞较大未完全贴附。吸出细胞悬液,重复非心肌细胞贴壁1次,最后将第2次吸出的细胞悬液接种于96孔板进行毒性剂量筛查。以细胞存活率反映细胞毒性变化,应用MTT法筛查1000、100、10、1和0.1μg/mL的制冰片、冰片对心肌原代细胞的毒性作用;采用三气培养通N2缺氧的方法构建心肌原代细胞缺氧/复氧(H/R)损伤模型,细胞缺氧20 h复氧4 h后,采用MTT法考察制冰片、冰片对心肌细胞H/R损伤的保护作用。【结果】10μg/mL的冰片和100μg/mL的制冰片对心肌细胞基本无毒性作用,从所选五个剂量整个趋势结果来看,制冰片的毒性作用弱于冰片的毒性;而H/R实验结果表明制冰片的保护作用优于冰片。【结论】从细胞水平阐明天竺黄炮制冰片的机理即为增效减毒机制,提示中药联合用药及炮制配伍的科学性和合理性。
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