【摘 要】
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用PCR方法从小尾寒羊基因组DNA中扩增编码PrPc核心片段DNA,并克隆到硫氧还原蛋白融合表达载体pET-32a(+)上,构建小尾寒羊PrPc核心片段表达重组质粒PrP-pET-32a(+).PrP-pET-32a(+)转化E.coliBL21,IPTG诱导融合表达小尾寒羊PrPc核心片段Trx-PrP27-30.Ni+离子亲和层析柱纯化蛋白,得到相对分子质量约为35kD的Trx-PrP27-3
【机 构】
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南京农业大学动物医学院,江苏,南京,210095;农业部动物检疫所,山东,青岛,266032 农业
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会
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用PCR方法从小尾寒羊基因组DNA中扩增编码PrPc核心片段DNA,并克隆到硫氧还原蛋白融合表达载体pET-32a(+)上,构建小尾寒羊PrPc核心片段表达重组质粒PrP-pET-32a(+).PrP-pET-32a(+)转化E.coliBL21,IPTG诱导融合表达小尾寒羊PrPc核心片段Trx-PrP27-30.Ni+离子亲和层析柱纯化蛋白,得到相对分子质量约为35kD的Trx-PrP27-30.以纯化的Trx-PrP27-30免疫PrPc基因敲除小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,筛选出6株能稳定分泌针对小尾寒羊PrPc核心片段特异单抗的杂交瘤细胞株2H3、4C6、5F11、7F1、7F8和7F11.免疫组化实验表明,2H3、4C6、5F11和7F11可特异性识别羊痒病脑组织切片中耐PK酶消化的PrPsc.
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