【摘 要】
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猪细小病毒1型(Porcine parvovirus type 1,PPV1)是引起猪繁殖障碍的主要病原之一,能够引起早期胚胎死亡、胎儿木乃伊化、死产、不孕、发情推迟及孕期返情等疾病。PPV1基因组
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猪细小病毒1型(Porcine parvovirus type 1,PPV1)是引起猪繁殖障碍的主要病原之一,能够引起早期胚胎死亡、胎儿木乃伊化、死产、不孕、发情推迟及孕期返情等疾病。PPV1基因组右侧编码3种结构蛋白(VP1、VP2和VP3),其中VP2为病毒主要衣壳蛋白,能诱导产生中和抗体,在诊断和免疫中起关键作用。为制备抗PPV1-VP2蛋白的单克隆抗体,以重组杆状病毒表达的VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞融合技术获得8株分泌抗PPV1-VP2蛋白的单抗杂交瘤细胞株,依次命名为8D7、8E4、4A1、5C6、8H6、5H6、4G3和5G5。这8株单抗腹水效价各为1:102400、1:102400、1:51200、1:51200、1:51200、1:51200、1:204800、1:51200;其中7株单抗重链亚类为IgG1,另1株(4A1)为IgM;有6株单抗轻链类型为κ,另2株(8D7和4A1)为λ型。免疫过氧化物酶单层细胞染色试验(IPMA)结果表明,这8株单抗均可与PPV1感染的猪睾丸细胞(ST)呈阳性反应;免疫印迹试验显示,这8株单抗均能与PPV1全病毒VP2蛋白发生特异性反应。利用制备的单抗(8E4株)建立了间接ELISA方法,用于重组PPV1-VP2蛋白表达动力学检测,结果表明重组蛋白72 h表达量最高;用单抗对PPV1体外增殖规律测定,该病毒感染后16 h检测到阳性细胞,说明病毒的复制周期小于24 h;用单抗进行的共聚焦显微技术观察到PPV1-VP2蛋白主要沿细胞核周围分布。本研究为该病毒诊断技术及分子生物学特性研究奠定了基础。
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