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目的痘苗病毒天坛株(vaccinia virus TinaTan strain,VTT)是中国特有的痘苗病毒毒株,VTT具有安全性高、验证广泛、应用时间长等特点,是基因工程病毒活载体疫苗研究的理想毒株,对其生物学特性和分子生物学特点研究得较清楚。然而,其也存在一定的副反应,故应用基因工程的方法获得免疫效果好,毒力低、副反应少的重组痘苗病毒,并有望成为更安全、更高效的基因工程载体。本课题组利用同源重组,荧光蚀斑筛选和Cre/Loxp系统构建的7段基因缺失重组痘苗病毒(the recombinant vaccinia virus,TTVAC7)已证实具有较好的遗传稳定性,体内和体外实验也表明TTVAC7毒力明显减弱。但是为了候选疫苗的研究和安全性评价,我们需要研究重组痘苗病毒TTVAC7的理化特性,对重组痘苗病毒活载体疫苗的规模化生产、保存、运输和净化具有一定的指导意义。材料与方法(1)材料:重组痘苗病毒TTVAC7由本实验室构建,天坛株痘苗病毒VTT和仓鼠肾细胞BHK-21由本实验室保存;DMEM培养液、0.25%的胰蛋白酶及胎牛血清购自美国的Hyclone公司,其他试剂均为国产分析纯;非接触式全自动超声细胞破碎机为BIORuPTOR公司产品,倒置显微镜为OLMPUS公司产品。(2)方法:将重组痘苗病毒TTVAC7和天坛株痘苗病毒VTT经热、酸、碱、乙醚、氯仿、胰蛋白酶、紫外线照射及超声波破碎处理后,接种于BHK-21细胞,通过测定TCID50观察上述理化因子处理前后TTVAC7和VTT毒价的变化,并分析这些理化因子对TTVAC7和VTT的影响。结果 TTVAC7经55℃作用15 mm,VTT经55℃作用30 min即可完全被灭活;在pH3~9的范围内,pH值的变化不会引起TTVAC7和VTT病毒滴度的显著变化;紫外线垂直距离10 cm和30 cm照射病毒液60 min,不能完全灭活病毒粒子;对氯仿敏感;经1%的胰蛋白酶37℃处理60 min,TTVAC7和VTT的病毒消度下降2个滴度以上;对乙醚不敏感;经40 HZ和80 HZ的非接触式超声处理60 min,TTVAC7和VTT的病毒滴度下降低于2个滴度。结论重组痘苗病毒TTVAC7和天坛株痘苗病毒VTT理化性质相似,均不耐高温,耐酸、碱、乙醚、紫外线及超声波,对氯仿和胰蛋白酶敏感。