【摘 要】
：
本文构建了水牛抑制素基因的干扰片段，希望借助PB载体，通过转基因技术将其导入水牛体内，干扰抑制素的表达以达到提高水牛繁殖力的目的。经过颗粒细胞转染实验也证明，构建的干扰片段表达载体对抑制素的表达起到了一定的抑制作用。同时通过6418筛选获得了一批稳定的阳性细胞，为进行显微注谢技术和核移植技术进行转基因的研究提供了研究材料。
【机 构】
：
华中农业大学,湖北武汉 广西大学,广西南宁
论文部分内容阅读
本文构建了水牛抑制素基因的干扰片段，希望借助PB载体，通过转基因技术将其导入水牛体内，干扰抑制素的表达以达到提高水牛繁殖力的目的。经过颗粒细胞转染实验也证明，构建的干扰片段表达载体对抑制素的表达起到了一定的抑制作用。同时通过6418筛选获得了一批稳定的阳性细胞，为进行显微注谢技术和核移植技术进行转基因的研究提供了研究材料。
其他文献
本研究以皮肤特异性小鼠超高硫启动子(UHS启动子)为前导区,构建了LEFI的皮肤特异性表达载体pCDsRed-UL,筛选稳定转染的细胞系作为核供体,为即将通过核移植和克隆技术获得高产绒量的转基因绒山羊打下基础.
本研究以FGF18基因为研究对象,利用RT-PCR、分子克隆等技术,成功构建毛囊特异性高表达FGF18基因的定点整合载体,为进一步研究FGF18与毛囊及毛发生长之间的关系,明确其对毛囊及毛发生长的调节作用,阐明FGF18的作用途径及调控机理奠定一定的基础,同时也为毛发生长的候选基因提供参考.
为探讨MC4R在牛生长中的精细结构与功能，本研究构建了牛MC4R-GFP融合表达蛋白载体。该研究利用基因克隆和载体构建技术成功构建了融合蛋白表达载体pEGFP-C1-MC4R，经测序比对证实基因序列正确，满足进一步试验要求，为下一步探讨MC4R信号通路奠定了基础。
本文探索了制备乳腺特异表达鲑鱼降钙素转基因山羊的两套方案,一套为随机整合,另一套是利用Cre/loxp系统和共整合有loxp-neo-tk-loxp框架的乳腺特异高表达人溶菌酶转基因山羊成纤维细胞(hLZGEF)的定位整合方案.
本研究构建的乳腺特异性表达载体PGN转染Bcap-37细胞后，转染组在mRNA转录水平和蛋白表达水平均显著高于对照组。同时山羊乳腺直接灌注PGN试验发现灌注组GH含量在转录水平和蛋白表达水平均略高于对照组，但转染组GHR mRNA表达显著高于对照组，结果提示乳腺组织可能通过GHR的高表达提高GH的利用效率，促进乳腺组织的发育和增加奶产量。本研究成功构建了乳腺特异性表达载体PGN，并在体内和体外证实
sfatl基因综合考虑猪和小鼠的密码子使用频率后对其密码子进行了优化，在其阅读框外引入了SalI和NotI等酶切位点，连接至pUC57克隆载体上，经过测序验证载体构建成功，再经过SalI和NotI酶切回收后连接至脂肪特异性表达载体L28上，命名为FAB P4-sfatl-polyA-neo。经酶切，测序鉴定，sfatl脂肪特异性单标记载体构建成功。
通过overlap-PCR方法克隆得到的秦川牛SHH基因全序列与GenBank的序列一致。通过对其蛋白质的跨膜结构、信号肽及亚细胞定位分析表明，牛SHH基因是一个胞外表达的蛋白。在小鼠和人上的研究表明，SHH通过SHH-Ptc-Smo通路来发挥其功能，但牛作为反当动物，其脂肪发育机理与小鼠和人有很大的差异，SHH信号通路在牛脂肪沉积中的作用也有待进一步的探讨，本研究获得秦川牛SHH原核表达产物为进
本文经测序和细胞水平发光情况表明，该双启动子双报告基因真核表达载体构建成功，绿色荧光的表达先于红色荧光的表达，载体较小，易于导入细胞进行功能研究。
目的：构建在哺乳动物细胞中表达的山羊TLR2绿色荧光蛋白融合表达载体.方法：根据克隆到T载体上的山羊TLR2测序结果,设计一对不含终止子的引物,将山羊TLR2 PCR产物连接到pEGFP-NI载体上,用磷酸钙法转染293T细胞,并在荧光显微镜下观察.结果：重组质粒经酶切和测序鉴定正确,且在293T细胞中表达.融合蛋白发出的绿色荧光表明TLR2-EGFP主要分布在细胞膜上.结论：成功构建pEGFP-