目的：本研究针对AF难溶于水的理化性质，开展利于AF体内吸收的口服制剂—（P(NVP-MGAM)）/AF口服胶束的研究，在KKAy自发性糖尿病小鼠模型考察了该胶束对糖脂代谢紊乱的改善效果，并通过炎症信号通路、PI3K/AKT和PPARγ信号通路阐述了（P(NVP-MGAM)）/AF胶束对KKAy糖尿病小鼠IR改善的可能作用机制，主要研究内容分以下4个方面：　　1.P(NVP-MGAM)/AF口服胶束的制备和性能考察　　在制备胶束时，注重对新材料的开发和应用，采用本实验室合成的新型聚合物乙烯基吡咯烷酮（NVP）-马来酸格尔伯特二十烷醇单酯共聚物（P(NVP-MGAM)）作为制备胶束的载体材料。　　方法：主药AF和载体P(NVP-MGAM)以1∶5的比例投料，采用透析法，制备穗花杉双黄酮口服胶束（P(NVP-MGAM)/AF）。（1）对制备的胶束开展了小鼠急性毒性试验和三项遗传毒性试验（包括小鼠精子畸形试验、沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）和小鼠骨髓细胞微核试验），进行安全毒理学评价，考察其安全性；（2）进行了胶束的粒径和电位测定、原子力显微镜（AFM）形态观察及胶束的包封率和载药量考察；（3）建立测定胶束中AF的高效液相色谱（HPLC)分析方法，进行胶束在模拟胃液、模拟肠液中的稳定性和体外释放研究；（4）以木犀草素为内标，建立测定生物样本中AF的超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法，进行胶束的药物动力学及体内组织分布研究。　　结果：（1）急性毒性试验证明P(NVP-MGAM)/AF胶束属无毒级，三项遗传毒性试验结果均为阴性，未见致突变作用；（2）胶束表征结果为粒径58.44±2.21nm，PDI0.137，包封率和载药量分别为86%和15%；（3）稳定性考察证明在模拟胃液、模拟肠液中，P(NVP-MGAM)/AF胶束在胃、肠的有效吸收时间内相对稳定，24h内累计释放率不超过12%；（4）药动学试验表明胶束中AF的生物利用度比原型药明显提高，半衰期明显延长，峰浓度（Cmax）由10.6μg/mL升至16.83μg/mL，达峰浓度时间（Tmax）由20min缓释为40min，半衰期（t1/2）由5小时缓释为18小时；组织分布考察证明胶束中AF在各组织中分布浓度明显高于AF混悬液组，随着时间延长，到3h～6h时，胶束组中AF在小肠、脾脏和胰腺浓度明显增高，而AF混悬液在胰腺、胃和肺组织分布相对较多，但小肠和脾脏组织中浓度很低。　　结论：制备的胶束生物安全性好，其粒径、包封率和载药量能满足胶束制剂的要求，具有抗酸碱性和缓控释的长循环效应，其生物利用度明显提高，并有明显的靶向性，能明显增强AF的治疗效果。　　2.P(NVP-MGAM)/AF对KKAy糖尿病小鼠糖脂代谢及IR的改善作用　　首次选择KKAy自发性糖尿病小鼠作为模型动物对（P(NVP-MGAM)）/AF胶束开展降糖效果评价，KKAy自发性糖尿病小鼠是目前较理想的自发性2型糖尿病模型，该动物模型在KK小鼠的基础上转入突变毛色基因（ay），其基因突变的遗传因素使该糖尿病小鼠易引发糖尿病，外加高脂饮食后发病率明显增加，其发病是遗传因素合并环境因素诱发，与人类2型糖尿病的病因非常相似。　　方法：（1）给药前及给药期间每周进行模型鼠一般症状观察，每周测定1次小鼠体重、饮水量和摄食量；（2）给药后第1-4、6周，眼眶后静脉丛采血（第6周摘眼球采血），取100μL抗凝全血用微纳芯生化分析仪测定模型鼠的糖脂生化指标，包括血清空腹血糖（FBG）、糖化血清蛋白（GSP）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度性脂蛋白（LDL）、高密度性脂蛋白（HDL）；（3）给药后第5周，做口服葡萄糖糖耐量试验（OGTT），模型鼠尾部取血用血糖仪测糖负荷后30min、60min、120min的血糖值（Glu），计算曲线下面积（AUC）；　　结果：（1）胶束制剂给药2周后，模型鼠动作迟缓，精神萎靡,皮毛失去光泽，饮水量、体重、摄食量持续增加的症状均有不同程度的减轻；（2）胶束制剂给药1周后，TG显著降低，2周后，FBG、GSP、TG显著降低，3周后CHOL显著降低,4周后HDL-C显著升高，6周后LDL-C显著降低、CHOL/LDL-C比值明显升高；（3）OGTT试验显示胶束组的AUC显著低于DM组；（4）胶束组TNF-a、hs-CRP、FFA及GHb均显著降低，QUICKI明显升高；（5）胶束组肝糖原及肌糖原均显著增加；（6）光镜观察，胶束组的胰岛数量和形态均较空白模型组有明显改善,肝细胞炎症和脂肪变性也有明显改善；（7）TEM超微结构观察，胶束组明显增加胰腺细胞和肝脏细胞的胞浆线粒体密度，修复损伤的内质网结构。　　结论：P(NVP-MGAM)/AF胶束可下调血糖和血脂水平，下调FFA和炎症因子水平，从而减轻脂毒性和炎症反应，改善糖脂代谢紊乱，增加对胰岛素的敏感性，改善胰岛素抵抗。　　3.P(NVP-MGAM)/AF胶束对KKAy糖尿病小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体γ（PPARγ）分子水平相关信号通路的影响　　PPARγ是脂类代谢的重要调节因子,激活后，可以降低血脂、血糖水平，还能抑制慢性炎症的发生,提高外周组织的胰岛素敏感性,从而改善IR。近年来，PPARγ作为重要的糖尿病药物作用靶点，已逐渐成为研究热点。本研究首次选择PPARγ为靶点，考察P(NVP-MGAM)/AF胶束对PPARγ分子水平相关信号通路的影响，探讨其抗糖尿病的可能分子机制。　　方法：（1）制作模型鼠肝脏组织的组织芯片（TMA），免疫组化法测PPARγ及其下游调控靶基因葡萄糖转运蛋白2（GLUT2）的蛋白表达；（2）提取模型鼠肝脏和骨骼肌的总RNA,反转录后用设计的PPARγ、GLUT2和GLUT4引物进行实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR），检测模型鼠肝脏PPARγ、GLUT2和骨骼肌PPARγ及其下游调控基因GLUT4的mRNA表达。　　结果：P(NVP-MGAM)/AF胶束对模型鼠肝脏中PPARγ和GLUT2的蛋白和mRNA均明显上调，胶束组对模型鼠骨骼肌中PPARγ和GLUT4的mRNA表达也明显上调，证明胶束能一定程度上激活PPARγ的活性，从PPARγ信号通路促进GLUT2和GLUT4蛋白合成，下调肝脏中葡萄糖（GS）的输出，增加GS向骨骼肌的转运。　　结论：P(NVP-MGAM)/AF胶束能通过PPARγ信号通路降低血糖，增强胰岛素敏感性，改善胰岛素抵抗。　　4.P(NVP-MGAM)/AF胶束对KKAy自发性糖尿病小鼠磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKt）胰岛素信号转导通路的影响　　PI3K/Akt信号通路是胰岛素的主要信号转导通路。胰岛素受体底物（IRS）是该信号通路的信号接头蛋白，其中IRS-1是胰岛素受体（InsR）的蛋白激酶活性的主要底物；PI3K是处于IRS后的胰岛素信号分子；Akt是PI3K激活后的下游的主要信号物质，Ser473属于Aktl的一种，发生磷酸化后发挥调节糖脂代谢、蛋白合成及细胞生长等生物学效应；叉头状转录因子FOXO1是胰岛素PI3K/Akt信号转导通路下游调节糖异生的关键调控因子。本研究考察胶束对模型鼠肝脏、骨骼肌中IRS、PI3K、Ser473和FOXO1的表达水平的影响，探讨胶束通过PI3K/AKt胰岛素信号通路改善胰岛素抵抗的可能机制。　　方法：将各实验组分为两组，一组注射胰岛素，一组不进行胰岛素处理。（1）采用蛋白免疫印记法（westenblotting,WB法）考察模型鼠肝脏和骨骼肌中IRS-1、PI3K、Akt磷酸化水平（P-Akt）及FOXOl蛋白表达情况；（2）制作模型鼠肝脏组织的组织芯片，用免疫组化法分析IRS-1、P-Akt的蛋白表达。　　结果：（1）WB法试验证明P(NVP-MGAM)/AF胶束明显上调肝脏和骨骼肌中IRS-1、P-Akt、PI3K蛋白表达，下调FOXO1蛋白表达；（2）组织芯片免疫组化试验进一步证明胶束上调模型鼠肝脏中IRS-1、P-Akt的蛋白表达。通过促进IRS-1的表达，提高肝脏、骨骼肌对胰岛素敏感性，增加激活的PI3K的含量，从而增强胰岛素介导的PI3K信号转导，通过上调P-Akt的表达，增强对下游靶信号分子的调节，抑制FOXO1的表达，减少糖异生。　　结论：P(NVP-MGAM)/AF胶束对胰岛素PI3K/Akt信号通路有明显的干预作用，从而提高胰岛素敏感性，改善胰岛素抵抗。　　总之，以上试验证实了P(NVP-MGAM)/AF在糖尿病治疗中的疗效及其对炎症信号通路、PPARγ信号通路、PI3K/Akt信号通路的调节作用。证明它通过多通路、多靶点的调节来改善糖脂代谢紊乱和胰岛素抵抗。制成胶束后，更有利于吸收，提高了生物利用度，使其治疗效果更显著，本研究对新剂型的开发和评价为糖尿病的防治开辟了一个新途径，制备的P(NVP-MGAM)/AF胶束对2型糖尿病动物模型有明显的治疗效果，使其有可能成为治疗糖尿病的一个极具潜能的新药。