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犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)和猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)是亲缘关系密切的两种细小病毒,都属于细小病毒科,原细小病毒属,肉食动物原细小病毒1型种的成员。犬细小病毒和猫细小病毒不仅能感染犬科、猫科、鼬科、浣熊科和灵猫科等多种动物,而且引起相似的临床症状;是危害肉食动物健康最严重的烈性传染病病原体之一;前者有多种抗原型且二者可混合感染动物,因此单凭临床症状难以做出鉴别诊断,必须借助实验室检测手段确诊。本研究经大量CPV VP2基因序列比对,利用Beacon designer7软件设计两对引物和五条MGB探针。引物CPV-305F/CPV-305R和探针CPV-2-305P(CPV-2)/CPV-2a-305P(CPV-2a)用于区分CPV-2疫苗株和其它抗原型试验;引物CPV-426F/CPV-426R和探针CPV-2-426P(CPV-2/2a)/CPV-2b-426P(CPV-2b)/CPV-2c-426P(CPV-2c)用于区分CPV-2a(2)、CPV-2b和CPV-2c抗原型试验。通过这两个单独的多重TaqMan real-time PCR试验可以有效的检测和区分CPV-2、CPV-2a、CPV-2b和CPV-2c四种抗原型CPV。该检测方法可检测10~1个拷贝的CPV-2,CPV-2a和CPV-2b重组质粒,10~2个拷贝的CPV-2c重组质粒;特异性试验表明本方法适合于CPV的检测,而和犬瘟热病毒、犬腺病毒和冠状病毒等均无交叉反应性;本方法经临床初步应用,并与PCR测序方法检测结果进行对比,显示两者检测结果符合率为100%。结果表明本研究成功建立了一种多重TaqMan real-time PCR检测方法,该方法能够用于检测和区分CPV四个抗原型,并可定量测定CPV DNA。本研究利用qPCR-HRM试验分析可检测单核苷酸多态性位点(SNP)和序列碱基组成变化的优势,依据FPV和CPV的SNP A4408C位点,设计一对引物,进化qPCR扩增;扩增完成后的数据用Applied Biosystems?High Resolution Melt Software v3.1软件自动分析;结果表明该方法能同时检测感染动物粪便中的CPV或FPV DNA。特异性试验表明本方法和犬瘟热病毒,犬腺病毒和犬冠状病毒等无交叉反应;敏感性试验表明该方法最低可以检测到4.2个拷贝的CPV和FPV的重组质粒;为评估本方法的可行性,80个疑似细小病毒感染临床样品用于该方法和PCR-测序以及病毒分离等试验的平行分析,结果证明,该方法和基因测序以及病毒分离等方法符合率高,其符合率分别是96.25%和85%。本研究成功建立了一种能够同时检测和区分CPV和FPV的诊断方法。