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目的:角膜是无血管和淋巴管的透明组织，是屈光介质的重要组成部分，当一些疾病发生时会导致病理性新生血管和淋巴管长入，从而降低角膜的透明度，导致视力下降甚至失明，增加角膜移植排斥发生率。针对角膜新生血管和淋巴管的治疗成为眼科临床亟待解决的问题之一。本研究的目的是探究角膜胶原交联术（cornealcollagencross-linking，CXL）对缝线诱导的大鼠角膜增殖活跃期的新生血管和淋巴管的影响。
方法：本研究采用10-0尼龙缝线诱导大鼠角膜新生血管和淋巴管生成，于缝线第7天大量新生血管形成后拆线。以拆线当天为实验观察的起始天数。实验分为2组：（1）单纯角膜新生血管组（CNV）：单纯缝线诱导角膜新生血管并于第7天拆线，拆线后立即刮除大鼠角膜上皮；（2）角膜胶原交联术组（CXL）：缝线诱导角膜新生血管后第7天拆线，拆线后立即刮除大鼠角膜上皮，0.22%核黄素（胶原纤维的交联剂及眼组织的保护剂）滴眼，每三分钟滴一次，持续半小时，裂隙灯观察核黄素渗入到前房后，9mW/cm2UVA持续照射280s，总能量为2.52J/cm2。拆线后第3天，透射电子显微镜观察两组角膜新生血管和淋巴管的超微结构变化，从微观结构观察角膜胶原交联术对新生血管和淋巴管内皮有无损伤的作用；第7天，大鼠全角膜免疫荧光染色观察淋巴管内皮透明质酸受体（LYVE-1）和血管内皮细胞标记分子（CD31）的表达，以评估角膜淋巴管和血管的情况；第7天、14天，裂隙灯观察对比角膜胶原交联术对角膜新生血管的生长有无抑制或消退的作用。第3天、7天、14天，以Real-timePCR分析两组血管和淋巴管相关血管内皮生长因子-A（VEGF-A）mRNA表达量的变化，以及相关炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA基因表达量的变化，从基因水平观察角膜胶原交联术对角膜新生血管和淋巴管以及角膜炎症的影响；免疫荧光染色检测两组CD68（单核巨噬细胞标记物）和CD45（白细胞标记物）的表达变化，从细胞水平观察角膜胶原交联对免疫炎症细胞的变化的影响。
结果：（1）拆线后第7天，与单纯新生血管组相比，角膜胶原交联组新生血管无明显减少，淋巴管部分消退。第14天，角膜胶原交联组的角膜新生血管较单纯角膜新生血管组多。（2）拆线后第3天，透射电子显微镜观察角膜新生血管和淋巴管的超微结构变化结果显示：单纯角膜新生血管组新生血管管腔可见大量红细胞，血管内皮细胞结构完整，形态正常，内皮细胞连接紧密，细胞质均匀，细胞核与核膜链接紧密；角膜胶原交联术组新生血管腔可见少许红细胞，血管内皮细胞结构受损，新生血管内皮细胞胞质出现小泡，细胞核与核膜间隙增宽，线粒体受损。单纯角膜新生血管组淋巴管管腔内无血细胞，内皮细胞结构完整，形态正常，细胞核周边圆滑；角膜交联术组淋巴管内皮细胞结构受损，新生淋巴管内皮细胞核皱缩，细胞核与核膜间隙增宽。（3）拆线后第3天，与单纯角膜新生血管组相比，角膜胶原交联组IL-1β和TNF-α的mRNA表达水平较高，IL-1β的mRNA表达升高具有统计学差异（P＜0.05）；拆线后第7天、14天，与单纯角膜新生血管组相比，角膜胶原交联组IL-1β、TNF-α、MCP-1的mRNA表达水平较高。（4）拆线后第3天、7天，与单纯角膜新生血管组相比，角膜交联组大鼠角膜VEGF-A的mRNA表达水平升高；拆线后第14天，CXL组VEGF-A的mRNA基因表达水平稍低于CNV组（5）拆线后第3天、7天，与单纯角膜新生血管组相比，角膜胶原交联组大鼠角膜的CD68表达量较低；拆线后14天，角膜交联组大鼠角膜的CD68表达量较高（6）拆线后第3天、7天，与单纯角膜新生血管组相比，角膜交联组大鼠角膜的CD45表达量降低；拆线后第14天，角膜交联组大鼠角膜的CD68表达量较高。
结论：角膜胶原交联术短期内具有抑制或消退角膜新生淋巴管的作用，本研究结果发现角膜胶原交联术刺激角膜炎症反应，可能进一步刺激血管和淋巴管生长，所以角膜胶原交联术无法长期有效抑制或者消退角膜新生血管和淋巴管。
方法：本研究采用10-0尼龙缝线诱导大鼠角膜新生血管和淋巴管生成，于缝线第7天大量新生血管形成后拆线。以拆线当天为实验观察的起始天数。实验分为2组：（1）单纯角膜新生血管组（CNV）：单纯缝线诱导角膜新生血管并于第7天拆线，拆线后立即刮除大鼠角膜上皮；（2）角膜胶原交联术组（CXL）：缝线诱导角膜新生血管后第7天拆线，拆线后立即刮除大鼠角膜上皮，0.22%核黄素（胶原纤维的交联剂及眼组织的保护剂）滴眼，每三分钟滴一次，持续半小时，裂隙灯观察核黄素渗入到前房后，9mW/cm2UVA持续照射280s，总能量为2.52J/cm2。拆线后第3天，透射电子显微镜观察两组角膜新生血管和淋巴管的超微结构变化，从微观结构观察角膜胶原交联术对新生血管和淋巴管内皮有无损伤的作用；第7天，大鼠全角膜免疫荧光染色观察淋巴管内皮透明质酸受体（LYVE-1）和血管内皮细胞标记分子（CD31）的表达，以评估角膜淋巴管和血管的情况；第7天、14天，裂隙灯观察对比角膜胶原交联术对角膜新生血管的生长有无抑制或消退的作用。第3天、7天、14天，以Real-timePCR分析两组血管和淋巴管相关血管内皮生长因子-A（VEGF-A）mRNA表达量的变化，以及相关炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA基因表达量的变化，从基因水平观察角膜胶原交联术对角膜新生血管和淋巴管以及角膜炎症的影响；免疫荧光染色检测两组CD68（单核巨噬细胞标记物）和CD45（白细胞标记物）的表达变化，从细胞水平观察角膜胶原交联对免疫炎症细胞的变化的影响。
结果：（1）拆线后第7天，与单纯新生血管组相比，角膜胶原交联组新生血管无明显减少，淋巴管部分消退。第14天，角膜胶原交联组的角膜新生血管较单纯角膜新生血管组多。（2）拆线后第3天，透射电子显微镜观察角膜新生血管和淋巴管的超微结构变化结果显示：单纯角膜新生血管组新生血管管腔可见大量红细胞，血管内皮细胞结构完整，形态正常，内皮细胞连接紧密，细胞质均匀，细胞核与核膜链接紧密；角膜胶原交联术组新生血管腔可见少许红细胞，血管内皮细胞结构受损，新生血管内皮细胞胞质出现小泡，细胞核与核膜间隙增宽，线粒体受损。单纯角膜新生血管组淋巴管管腔内无血细胞，内皮细胞结构完整，形态正常，细胞核周边圆滑；角膜交联术组淋巴管内皮细胞结构受损，新生淋巴管内皮细胞核皱缩，细胞核与核膜间隙增宽。（3）拆线后第3天，与单纯角膜新生血管组相比，角膜胶原交联组IL-1β和TNF-α的mRNA表达水平较高，IL-1β的mRNA表达升高具有统计学差异（P＜0.05）；拆线后第7天、14天，与单纯角膜新生血管组相比，角膜胶原交联组IL-1β、TNF-α、MCP-1的mRNA表达水平较高。（4）拆线后第3天、7天，与单纯角膜新生血管组相比，角膜交联组大鼠角膜VEGF-A的mRNA表达水平升高；拆线后第14天，CXL组VEGF-A的mRNA基因表达水平稍低于CNV组（5）拆线后第3天、7天，与单纯角膜新生血管组相比，角膜胶原交联组大鼠角膜的CD68表达量较低；拆线后14天，角膜交联组大鼠角膜的CD68表达量较高（6）拆线后第3天、7天，与单纯角膜新生血管组相比，角膜交联组大鼠角膜的CD45表达量降低；拆线后第14天，角膜交联组大鼠角膜的CD68表达量较高。
结论：角膜胶原交联术短期内具有抑制或消退角膜新生淋巴管的作用，本研究结果发现角膜胶原交联术刺激角膜炎症反应，可能进一步刺激血管和淋巴管生长，所以角膜胶原交联术无法长期有效抑制或者消退角膜新生血管和淋巴管。