【摘 要】
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本文合成了一种可用作生物大分子分析的新型高效液相亲和色谱固定相。并对该固定相的性能进行了初步的考察。 本文以水合氯化氧锆为起始原料,六次甲基四胺和尿素作为沉淀剂
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本文合成了一种可用作生物大分子分析的新型高效液相亲和色谱固定相。并对该固定相的性能进行了初步的考察。 本文以水合氯化氧锆为起始原料,六次甲基四胺和尿素作为沉淀剂,在正庚烷乳液中生成3~5μm的非多孔二氧化锆与脲醛树脂复合物微球,此基体由于不存在颗粒内部空隙的质量传递,仅在表面有短的扩散路程,因此对具有低扩散性的生物大分子具有快速的质量传递,从而缩短滞留时间,利于保持生物大分子高的生物活性和回收率。并用电子扫描显微镜检验该基体的结构和粒径。为了克服非多孔基体柱容量低的缺点,在基体表面键合上长度合适的星型树状间隔臂。此树状间隔臂是以末端为酰胺的二氧化锆与脲醛树脂复合物基体为核心,以丙烯酸甲酯为马氏加成试剂,乙二胺为酰胺化试剂,通过重复三次马氏加成反应、酰胺化反应得到的。树状间隔臂的生成过程用13C固体核磁共振技术进行检测。最后,用两种不同的方法键合上RNA和DNA两种配体。RNA配体的键合方法为:将RNA与溴水反应得到8-Br-RNA,然后在NaOH(pH=11)溶液中将此RNA与带有树状间隔臂的活化基体反应,从而得到用作生物大分子分离的亲和色谱固定相[RNA-(PAMAM)-(Zirconia-UF resin)]。DNA配体的键合方法为:将上述带有树状间隔臂的基体用丁二酸酰化法得到CM-ZrO2-UF再用NHS(N-羟基丁二酰亚胺)活化。然后,使之与脱氧核糖核酸(DNA)键合,从而制备了一种生物特效亲和色谱固定相[DNA-(PAMAM)-(Zirconia-UF resin)]。采用紫外吸收光谱法对配体容量进行确定。通过对这两种亲和色谱柱操作参数的摸索,考察了上述两种固定相对各种核酸碎片和蛋白质等生物大分子的分离性能。
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