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目的: 通过研究NSCLC外周血中CTCs与MDSCs的表达规律,并采用扶正中药金复康口服液进行体外验证,揭示肺癌发病与转移核心病机“正虚伏毒”的生物学基础,丰富“扶正治癌”学术思想体系。 方法: 1.体内研究以流式细胞术检测NSCLC患者外周血中MDSCs和Tregs的表达比例变化,并收集临床检测免疫细胞及细胞因子,分析其与NSCLC临床分期的相关性; 2.体内研究以阳性富集法和免疫荧光法检测NSCLC外周血中CTCs,分析其与NSCLC临床分期的相关性; 3.体外研究以金复康冻干粉干预NSCLC循环肿瘤细胞系(CTC-TJH-01),采用流式细胞术、彗星电泳、Western Blot等方法,检测金复康冻干粉对循环肿瘤细胞系的干预作用; 结果: 1.NSCLC患者外周血中髓源性抑制细胞的表达规律:①与健康组相比,NSCLC患者外周血中MDSCs不同亚群及Tregs的比例均升高,且具有统计学意义(4.60±1.59,p<0.05;25.11±12.15,p<0.05;3.69±2.24,p<0.05);②mMDSC表达水平与临床分期具有相关性(rs=0.378,p<0.001),而pmnMDSC表达水平与NSCLC的临床分期不具有相关性(p>0.05);③MDSC与外周血中CD4+、CD8+T细胞及Tresg细胞之间不具有相关性,但Tregs与CD4+T细胞及CD4+/CD8+比值具有相关性(p<0.05);④pmnMDSC与IL-8及TGF-β具有相关性(p<0.05);而mMDSC与IL-6、IL-8、sIL-2受体及TGF-β具有相关性(p<0.05);而Tregs与细胞因子之间未发现明显相关性;⑤采用ROC曲线进行分析提示mMDSC与NSCLC的临床分期具有更高的特异性与灵敏度; 2.NSCLC患者CTCs的表达规律:NSCLC外周血CTCs阳性率为94.0%(79/84), ①CTCs计数与NSCLC临床分期呈负相关,差异具有统计学意义(rs=-0.249,p=0.023);②CTCs计数与NSCLCⅠ-ⅢA期和ⅢB-Ⅳ期之间具有相关性,具有统计学意义(rs=-0.227,p=0.038);③CTCs与NSCLC的病理类型之间不具有相关性(p=0.352,rs=-0.103)。 3.金复康可抑制CTCs增殖,上调CTC细胞p53、p21、Fas、Caspase-3和p16蛋白的表达,下调Survivin、Cyclin D1和Cyclin E1的表达;金复康可以诱导细胞内ROS表达升高;金复康可以诱导CTC细胞DNA损伤。 结论: 1.MDSCs及CTCs与NSCLC的临床分期具有相关性,初步显示MDSCs及CTCs可能是NSCLC核心病机“正虚伏毒”的生物学基础; 2.金复康冻干粉可以阻滞CTC的增殖周期,上调细胞内ROS的表达,诱导DNA损伤,促进CTC的凋亡,证实金复康具有“扶正蠲毒”的功效,为扶正治癌提供了理论依据; 3.本研究初步揭示NSCLC核心病机“正虚伏毒”的现代生物学基础,为进一步的药物干预提供了相应的靶点,为临床应用提供理论依据,丰富中医学对肿瘤发病及转移的病因病机认识。