基于循环肿瘤细胞和髓源性抑制细胞表达规律探讨肺癌转移核心病机“正虚伏毒”的生物学基础

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目的:  通过研究NSCLC外周血中CTCs与MDSCs的表达规律,并采用扶正中药金复康口服液进行体外验证,揭示肺癌发病与转移核心病机“正虚伏毒”的生物学基础,丰富“扶正治癌”学术思想体系。  方法:  1.体内研究以流式细胞术检测NSCLC患者外周血中MDSCs和Tregs的表达比例变化,并收集临床检测免疫细胞及细胞因子,分析其与NSCLC临床分期的相关性;  2.体内研究以阳性富集法和免疫荧光法检测NSCLC外周血中CTCs,分析其与NSCLC临床分期的相关性;  3.体外研究以金复康冻干粉干预NSCLC循环肿瘤细胞系(CTC-TJH-01),采用流式细胞术、彗星电泳、Western Blot等方法,检测金复康冻干粉对循环肿瘤细胞系的干预作用;  结果:  1.NSCLC患者外周血中髓源性抑制细胞的表达规律:①与健康组相比,NSCLC患者外周血中MDSCs不同亚群及Tregs的比例均升高,且具有统计学意义(4.60±1.59,p<0.05;25.11±12.15,p<0.05;3.69±2.24,p<0.05);②mMDSC表达水平与临床分期具有相关性(rs=0.378,p<0.001),而pmnMDSC表达水平与NSCLC的临床分期不具有相关性(p>0.05);③MDSC与外周血中CD4+、CD8+T细胞及Tresg细胞之间不具有相关性,但Tregs与CD4+T细胞及CD4+/CD8+比值具有相关性(p<0.05);④pmnMDSC与IL-8及TGF-β具有相关性(p<0.05);而mMDSC与IL-6、IL-8、sIL-2受体及TGF-β具有相关性(p<0.05);而Tregs与细胞因子之间未发现明显相关性;⑤采用ROC曲线进行分析提示mMDSC与NSCLC的临床分期具有更高的特异性与灵敏度;  2.NSCLC患者CTCs的表达规律:NSCLC外周血CTCs阳性率为94.0%(79/84),  ①CTCs计数与NSCLC临床分期呈负相关,差异具有统计学意义(rs=-0.249,p=0.023);②CTCs计数与NSCLCⅠ-ⅢA期和ⅢB-Ⅳ期之间具有相关性,具有统计学意义(rs=-0.227,p=0.038);③CTCs与NSCLC的病理类型之间不具有相关性(p=0.352,rs=-0.103)。  3.金复康可抑制CTCs增殖,上调CTC细胞p53、p21、Fas、Caspase-3和p16蛋白的表达,下调Survivin、Cyclin D1和Cyclin E1的表达;金复康可以诱导细胞内ROS表达升高;金复康可以诱导CTC细胞DNA损伤。  结论:  1.MDSCs及CTCs与NSCLC的临床分期具有相关性,初步显示MDSCs及CTCs可能是NSCLC核心病机“正虚伏毒”的生物学基础;  2.金复康冻干粉可以阻滞CTC的增殖周期,上调细胞内ROS的表达,诱导DNA损伤,促进CTC的凋亡,证实金复康具有“扶正蠲毒”的功效,为扶正治癌提供了理论依据;  3.本研究初步揭示NSCLC核心病机“正虚伏毒”的现代生物学基础,为进一步的药物干预提供了相应的靶点,为临床应用提供理论依据,丰富中医学对肿瘤发病及转移的病因病机认识。
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