【摘 要】
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昆虫杆状病毒表达载体系统（BEVS）是一种利用杆状病毒作为外源基因的载体,通过感染昆虫细胞或者昆虫幼虫来表达外源蛋白的系统它是重要的真核表达系统之一。它具有安全性能好,携带外源基因的容量大,表达的真核基因产物可以进行正确的折叠与修饰因而具有很高的生物活性等优点,目前被广泛的应用于各种重组蛋白的生产。但是重组蛋白的表达量还不能达到理想的水平,如何提高重组蛋白的表达水平成为提高昆虫杆状病毒表达系统效率
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昆虫杆状病毒表达载体系统（BEVS）是一种利用杆状病毒作为外源基因的载体,通过感染昆虫细胞或者昆虫幼虫来表达外源蛋白的系统它是重要的真核表达系统之一。它具有安全性能好,携带外源基因的容量大,表达的真核基因产物可以进行正确的折叠与修饰因而具有很高的生物活性等优点,目前被广泛的应用于各种重组蛋白的生产。但是重组蛋白的表达量还不能达到理想的水平,如何提高重组蛋白的表达水平成为提高昆虫杆状病毒表达系统效率的核心问题。本实验室已合成了猪gam干扰素基因（约500bp）。在此基础上,本研究利用定点诱变技术,在不改变氨基酸序列的情况下,将该基因DNA序列中的ACA序列诱变为ACC。并克隆到携带有mazf基因表达盒式结构的昆虫杆状病毒供体载体中,从而获得重组供体质粒mh （b）-gam1-mazf。该质粒经magic的方法和昆虫杆状病毒受体质粒在大肠内进行结合转移,获得重组杆状病毒Ac-gaml-mazfo用该质粒转染昆虫sf9细胞,western印迹检测结果表明重组猪gam干扰素基因在昆虫细胞sf9中得到表达。据报道mazf能够特异性的识别并切割mRNA中的ACA序列,从而有效的降低宿主内源蛋白质的合成,而不带有ACA序列的目的蛋白mRNA不受其影响。为研究mazf对外源蛋白在昆虫细胞内表达的影响,我们用Ac-gam1-mazf和Ac-gam分别转染昆虫sf9细胞,western印迹检测结果表明重组猪gam干扰素基因在携带有mazf蛋白的昆虫细胞sf9中的表达量显著提高。由此可以初步证明mazf确实可以提高外源目的基因在昆虫细胞内的蛋白表达量。在进一步的实验中,为了使重组猪gam干扰素基因在昆虫细胞sf9中的蛋白质表达含量进一步提高,我们计划收集初次感染之后的病毒粒子再反复多次转染昆虫sf9细胞,达到经考马斯亮蓝染色后可直接从SDS-PAGE上看到目的蛋白的表达水平,从而为实现提高昆虫杆状病毒表达系统的效率问题提供了一种新方法,也为实现外源蛋白在昆虫杆状病毒表达系统的规模化生产奠定技术基础。
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