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微小RNA是一类长度为二十几个核苷酸的内源性非编码调控RNA,短发夹状miRNA可在细胞内直接转化为siRNA,通过序列特异性抑制或针对mRNA降解来调控基因表达,从而参与细胞发育、增殖及凋亡等一系列重要生物学进程。本研究应用RNAi技术沉默RhoC基因观察其抗肿瘤作用,探讨特异性抑制RhoC基因表达对卵巢癌细胞作用的影响。针对RhoC的mRNA序列设计合成编码miRNA的DNA模板,经过鉴定、测序证明并成功的构建了pcDNATM6.2-GW/EmGFP-RhoC-miRNA真核表达载体(以后简称RhoC-miRNA),并转染人卵巢癌SKOV3细胞,转染RhoC-miRNA重组质粒后能特异地降解细胞内RhoC基因转录的mRNA,从而抑制RhoC蛋白表达;细胞计数统计结果显示,特异性干扰组活细胞的增殖速率明显低于非特异性干扰组、空白对照组;采用划痕法检测细胞趋向运动能力,利用细胞穿越Matrigel基质实验检测细胞侵袭能力结果示:RhoC-miRNA载体有效地特异性地抑制SKOV3细胞增殖、趋向运动能力及侵袭能力,其机制为下调了卵巢癌细胞中MMP2蛋白表达。关闭RhoC基因后,SKOV3细胞对紫杉醇的敏感性显著提高,与单独使用紫杉醇相比,RhoC-miRNA重组质粒联合紫杉醇组中促进凋亡的基因Caspase-3明显增高,而抗凋亡蛋白Suvivin mRNA水平显著降低。本实验成功构建了RhoC基因的干扰基因miRNA真核表达载体pcDNATM6.2- GW/EmGFP-RhoC-miRNA,可以在人卵巢癌细胞内长期“敲弱”(knock down)RhoC基因,通过抑制RhoC基因下游的细胞调控系统,抑制SKOV3细胞增殖、趋向运动能力及侵袭能力,间接恢复卵巢癌细胞对化疗的敏感性。这将为揭示卵巢癌转移的分子机制奠定基础,也将为卵巢癌的基因治疗开辟一条崭新的途径。