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目的：流行性乙型脑炎是危害人类健康比较严重的虫媒病毒。尽管目前乙脑的发病率有所下降,但发病区域仍呈现不断扩大的趋势。加强乙脑的监测,就可以评估该地区乙脑的流行状况。蚊子是JEV的主要传播媒介,对蚊子的流行性乙型脑炎病毒和虫媒病毒进行分子流行病学监测,对疾病预防具有防范意义。方法：首先将云南省景洪县采集15份蚊虫样品研磨接种BHK-21和C6/36单层细胞,待出现细胞病变。提取病毒RNA,并反转录cDNA进行PCR鉴定将目的基因克隆到pMD18-T载体,送上海生工测序。同时进行盖塔病毒、辛德毕斯、基孔肯雅病毒的PCR鉴定,回收并测序。在此基础上构建了乙脑基因Ⅰ型标准质粒,建立了基于SYBR Green Ⅰ染料的Real-time PCR检测方法,选取Ct值制作标准曲线。结果：乙脑PCR扩增目的基因经测序验证为乙脑基因Ⅰ型,然后构建应用荧光定量PCR标准质粒。研究建立的标准曲线能够准确定量目的基因,线性相关度很高,呈现良好的重复性,熔解曲线为单一峰型,未出现非特异性扩增。SYBR Green Ⅰ Real-time PCR与传统方法相比灵敏度要高10倍,而且与猪蓝耳病毒等,均不发生非特异性扩增,具有良好的特异性。结论：鉴定了基因Ⅰ型乙脑病毒,并构建了快速检测乙脑Ⅰ型的检测方法。通过实验初步验证了其具备良好的灵敏性和重复性,为以后乙脑的流行病学调查奠定了基础。