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甘薯褪绿矮化病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)是危害甘薯的主要病毒之一,SPCSV能与多种病毒共侵染甘薯形成协同病害。通过RNA干扰(RNAi)技术获得转基因植物已经成为防治植物病毒病的行之有效的措施。近年来,又出现了一种基于人工小RNA(artificial microRNA,amiRNA)干扰技术的抗病毒转基因新策略,该技术具有抗性水平高、稳定性强、安全性高等多种特点。SPCSV编码一个Ⅲ型的RNA内切酶(RNA endoribonucleaseⅢ,RNase3),推测其为病毒编码的基因沉默抑制子。本项研究拟构建RNase3基因的干扰载体和植物表达载体,利用RNAi技术的原理,探索RNase3基因的功能。获得的主要结果如下:(1)以SPCSV西非株系(SPCSV WA)的RNase3基因为目的基因,构建了其植物表达载体和干扰载体。将RNase3基因以反向重复的方式克隆到pBlue NiRIntron载体的内含子两侧,再将含有内含子的反向重复片段插入到中间载体pROK219上,最后将“35S启动子-反向重复片段-NOS终止子”的片段克隆到植物表达载体pBin19上,成功构建了SPCSV RNase3基因的hpRNA干扰载体p Bin19 Ri。(2)同时,将RNase3完整基因克隆至pROK219上,再将含“35S启动子-RNase3-NOS终止子”的片段克隆至pBin19上,成功构建了SPCSV RNase3基因的植物表达载体p Bin19 R3。(3)利用WMD3平台设计并筛选ami RNA,通过改造拟南芥前体mi R159a为pre-amiR159a-R3,使之可以表达靶向RNase3的amiRNA,人工合成该基因并克隆至载体PBI121上,成功构建了RNase3基因的ami RNA干扰载体PBI121 amiR。(4)以上载体经冻融法转化农杆菌EHA105后,通过农杆菌介导的叶盘转化法,将载体转入普通烟草K326中。目前已经获得部分再生植株,其中转化表达载体p Bin19的烟草14株,转化发卡RNA(hairpin RNA,hpRNA)干扰载体p Bin19 Ri的烟草14株,转化ami RNA干扰载体PBI121 ami R的烟草18株。