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前言 近年发现正常人及发热、肿瘤患者血清和尿液中存在着肿瘤坏死因子结合蛋白（TNF-BP），也称肿瘤坏死因子抑制因子（TNF-INH），并证实其为可溶性的肿瘤坏死因子受体（sTNFR）。TNFR广泛存在于骨髓细胞、脂肪细胞、人胚肺细胞、淋巴细胞、上皮细胞、成纤维细胞以及多种肿瘤细胞的表面。在正常的血液和尿液中只有少量sTNFR，在许多感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等sTNFR水平升高。sTNFR能以高度亲和力和高度特异性地与膜TNFR竞争地与TNF结合，从而参与免疫调节。由于sTNFR与某些疾病变化密切相关，已引起众多学者重视。在国外sTNFR55作为一种指标用于某些疾病的监测，比如类风湿性关节炎、骨关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病，同时也应用于艾滋病及肿瘤的诊断和预后评价。 目前已认识到糖尿病存在异质性。随着研究的进展，将会有很多机制明确的糖尿病从2型糖尿病中分出来。更有资料证明许多细胞因子包括白介素（IL）-1、TNF、IL-6可能参与糖尿病的发病。有研究提示2型糖尿病可能是细胞因子介导的炎症反应，是一种免疫性疾病，炎症在糖尿病的发病机制起媒介作用。由于2型糖尿病在病因方面存在异质性，对2型糖尿病病因的认识需要进一步深入。尤其是2型糖尿病消瘦型，临床主要是以β细胞功能缺陷为主，同时伴有胰岛素抵抗。可能表现为sTNFR55明显高于肥胖型2型糖尿病。 目的 在目前2型糖尿病病因学有多争议的情况下，本文旨在把sTNFR55作为免疫炎症指标，应用ELISA法（双抗体夹心法），通过对2型糖尿病患者的消瘦组和肥胖组的血清中sTNFR55水平进行检测，并与GAD-Ab进行相关分析，探讨2型糖尿病中消瘦型是否有别于肥胖型糖尿病病因，是否有其独立的免疫炎症学说。实验对象 住院及专科门诊2型糖尿病人40例，年龄在40一55岁之间，诊断糖尿病5一年，均符合1999年WHO的诊断标准，排除原发心、肺、肾疾患及泌尿系感染，肺感染，在一个月内未发生糖尿病酮症酸中毒及其他急性并发症，通过病史，体检、心电图、眼底检查及荧光造影及神经传导等辅助检查排除其他疾患。根据体重指数（BMI）分为BMI<21消瘦组和BMI>26的肥胖组，BMI介于21 26之间的不在本研究范围。测得sTNFRS:，谷氨酸脱梭酶抗体（GAD一Ab）及其它一般资料。同时要求C肤水平空腹>400nMoFL，餐后2小时>soonMoFL，除外1型糖尿病和LADA。除外发病时肥胖以后消瘦的病人。实验材料一、试剂人sTNF一凡5定量EIA试剂盒，购于上海森雄科技实业有限公二、实验仪器离心机，酶标仪等。实验方法 一、血清sTNF凡5测定 （一）原理最常用的是双抗体夹心法测sTNFR。其基本原理是选择两株对s，rN FR的不同位点的单克隆抗体，暂称之为抗sTNFR单克隆抗体1和2（anti sTNFR McAbl，2）。用MeAbl包被固相载体，使待测sTNFR标本与之反应，然后加人标记的McAbZ，标记物常用酶，同位素，生物素等。通过测定结合了sTNFR的抗体标记，计算，rNFR的含量。同时用标准品s翎FR做标准曲线。据Adolf等报道，42例正常人血清中sTNF民5的含量为2 .1士1 .0林扩L（均值土标准差，正常范围是0.52一5.4林g/L），16例正常人尿液sTNFR55含量为2.2士1.2卜g/L（正常范围是0.78一4.3卜岁L）。Broekhaus等报道正常人血浆中s，rN FRS。含量为2.68士0.94n扩nil，s，rN FR75含量为2.36士0 .sn群耐。 （二）步骤 1 .48孔微孔板，已包被抗人sT NFR55抗单抗（McAbl）。 2.收集血液标本，采集血清一20℃保存，试验前一次性融解。 3.建立标准曲线，设标准孔8孔，每孔中加人样品稀释液100闪，第一孔加标准品100醉，混匀后用加样器吸出100泌，移至第二孔，如此反复作对倍稀释至第七孔，最后，从第七孔中吸出100闪弃去，使之体积均为100醉，第八孔为空白对照。 4.加样，待测品孔中每孔加人样品稀释液及待测血清各50闪共40孔，其中消瘦组22孔，肥胖组18孔。 5.将反应板置37℃120分钟，标准品及样品中的sTNFR55与单抗（MeAbl）结合。 6.充分洗板后，每孔中加人第一抗体工作液50闪，加人生物素化的抗人srINFR55抗体形成免疫复合物连接在板上。 7.充分混匀后置37℃60分钟反应。 8.洗板后加酶标抗体工作液，置37℃60分钟，辣根过氧化物酶标记的strep颐din与生物素结合即标记的MeAbZ被加人其中。 9.每孔中加人底物工作液100闪（四甲基苯）置37℃暗处反应5一10分钟，出现黄色。 10.每孔中加人终止液硫酸混匀。 11.在490lun处测吸光值。 （三）以标准品之吸光值画出标准曲线，查出相应人sTNFR55含量。 sTNFR55标准品倍比稀释，sTNFR55最高浓度为sn扩血。sTNFRss标准曲线为y=0.1002+0.0798x刃.0169x2+0.0011犷，:=0.992。 二、以D一Ab测定来源临床内分泌实验室的定性分析 三、统计学处理 GAD一Ab用定性分析表示，其他数据以均数土标准差（又士s）表示，组间比较采用t检验处理，两变量间相关采用2 xZ列联表资料的xZ检验处理。实验结果 一、如表1所示两组2型糖?