邻苯二甲酸二丁酯对F1代斑马鱼的毒性研究

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随着工业的迅速发展,越来越多的化学物随着人类生产和生活排放到环境中,给人类及其赖以生存的环境带来了隐患,邻苯二甲酸二丁酯(DBP)属于邻苯二甲酸酯类物质(PAEs),是一类重要的环境内分泌干扰物(EDCs),它主要作为塑料产品的增塑剂和软化剂。近年来,随着塑料垃圾的大量增加,DBP及其它各类PAEs成为全球性最普遍的污染物之一,其健康危害引起了广泛关注。本研究探讨了低浓度DBP的生殖发育毒性及远期效应。选用模式生物斑马鱼,将48对成年斑马鱼随机分为4组:空白对照组、丙酮溶剂对照组、1250μg/L DBP高剂量组、和625μg/L DBP(?)低剂量组,每组12对。连续暴露于DBP 30天后,将各组的雌雄鱼交配,孵化出的F1代斑马鱼在清水中饲养至180dph。将所得F1代成年斑马鱼混合自然交配,记录其产卵量、受精率和72h孵化率。为进一步了解DBP暴露分别对F1代雄鱼和雌鱼生殖能力的影响,设计与对照组雌/雄鱼分别进行的置换交配实验。每个DBP处理组的F1代随机选12条雄鱼与对照组12条雌鱼进行自然交配。同样的置换也被用于每个DBP处理组的雌鱼,记录其产卵量、受精率和72h孵化率。测量F1代斑马鱼身长、体重等生长发育指标,进行性腺的病理组织学检查,同时检测卵黄蛋白原(VTG) mRNA表达的变化以考察DBP对斑马鱼是否具有雌激素效应。结果显示,625μg/L DBP处理组F1代斑马鱼平均每缸鱼的产卵数为114.5枚,与空白对照组和溶剂对照组相比显著减少;1250μg/L处理组的雌鱼产卵极少,每缸小于10个鱼卵,显著低于空白对照组与溶剂对照组(p<0.01)。无论是雌鱼还是雄鱼,625μg/L DBP处理组与1250μg/L的DBP处理组F1代斑马鱼平均体长均显著低于空白对照组和溶剂对照组。置换交配试验中,DBP组F1代雄鱼被对照组F1代雄鱼代替时平均每缸产卵数为394±46枚,受精率92±6%,而对照处理组每缸产卵数432±38枚,受精率为95±8%,两者差异无统计学意义;而DBP组F1代雌鱼被对照组F1代雌鱼代替时,单次交配平均每缸产卵数为56±14个,受精率为36±10%,无论是产卵数还是受精率与对照组相比差异均有统计学意义。卵巢组织病理学检查显示,与对照组相比,625μg/L DBP处理组F]代雌性斑马鱼卵巢组织中仍可见大量成熟的卵黄生成期卵母细胞(Voc),提示卵巢发育均成熟有产卵能力,但早期的核周卵母细胞(Poc)轻微增多。1250μg/L DBP处理组F1代雌性斑马鱼卵巢组织中成熟的Voc细胞略微减少,皮质囊泡期卵母细胞(Coc)及Poc细胞增多,提示卵巢发育可能受到轻微的抑制。精巢组织病理学检查则显示DBP处理组的F1代雄性斑马鱼精巢发育受到明显抑制,生精小管畸形、精子数量减少及间质(Leydig)细胞增生同时存在于精巢中。VTG mRNA表达试验发现DBP暴露不诱导VTGmRNA在染毒亲代及F1代雄鱼体内表达,提示DBP对斑马鱼无雌激素样效应。DBP对斑马鱼的毒效应与它引发雄性大鼠、狨猴和人类的睾丸反应相类似,因此为研究睾丸发育不全综合征(TDS)提供了一个适合的动物模型,在这一领域应该进行更深入的研究。
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