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目的1.分离藏药甘肃马先蒿的化学成分。2.优化藏药甘肃马先蒿的醇提工艺。3.筛选藏药甘肃马先蒿抗氧化、抗缺氧及抗疲劳的活性组分。4.建立藏药甘肃马先蒿苯乙醇苷类成分的纯化工艺。5.探究藏药甘肃马先蒿苯乙醇苷对高原运动性疲劳的改善作用。方法1.采用D101型大孔吸附树脂富集藏药甘肃马先蒿总环烯醚萜苷、聚酰胺柱富集总苯乙醇苷,以中压柱层析技术快速分离、制备上述化学部位中的目标化合物,通过MS、NMR与DEPT等波谱方法分析,定性鉴定化合物。2.建立HPLC法测定藏药甘肃马先蒿目标成分（4个环烯醚萜苷及2个苯乙醇苷）的含量,在单因素试验的基础上,采用L9（34）正交试验明确最佳醇提工艺。3.运用大孔吸附树脂结合聚酰胺柱富集分离藏药甘肃马先蒿水提物中的各化学部位（药材水提物,苯乙醇苷,环烯醚萜苷,大极性成分）。以维生素C（VC）为阳性对照,采用体外抗氧化方法检测各化学部位的抗氧化能力;通过不同原理的缺氧模型,研究各化学部位的抗缺氧能力;采用负重游泳实验制备运动型疲劳模型,通过负重游泳实验测定小鼠力竭游泳时间,生化法测定血清、肝脏及骨骼及组织中的LA、糖原、ATP含量及CK活力变化,确定抗运动疲劳活性组分。4.以Verbascoside和Isoverbascoside的质量分数为考察指标,通过静态吸附和动态解吸附实验,从01A1、D101、HPD100、AB-8、XAD-6、DM130、DM-301、DM-201、YWD06B及YWD06C中筛选出最佳树脂,确定藏药甘肃马先蒿总II 苯乙醇苷的最佳纯化工艺。5.72只BALB/C小鼠（♀♂各半）,随机分为常氧空白对照组（NG,灭菌注射用水0.2 m L/20 g）、缺氧模型对照组（HG,灭菌注射用水0.2 m L/20 g）、红景天胶囊阳性对照组（Rhodiola,0.5 g/kg）、苯乙醇苷低剂量组（Ph Gs-L,0.1 g/kg）、苯乙醇苷中剂量组（Ph Gs-M,0.3 g/kg）、苯乙醇苷高剂量组（Ph Gs-H,0.5 g/kg）6组,每组12只。除NG组置于本地海拔约1500 m,其余各组均于模拟海拔8000 m的高原环境饲养。缺氧暴露期间,每天于固定时间进入氧舱,在模拟海拔4000 m的高原环境灌胃给药7 d,末次给药1h后,于海拔4000 m进行力竭游泳实验。记录小鼠力竭游泳时间,测定血常规指标,HE染色观察小鼠肝脏及骨骼肌组织病理改变,生化法检测糖原、MDH、SDH、PK、LDH、PA、LA、Na+K+-ATP、Ca2+Mg2+-ATP、BUN、SOD、MDA、GSH水平。结果1.经MS、NMR与DEPT最终分离鉴定了5种环烯醚萜苷类化合物:Euphroside（1）、Ixoroside（2）、Plantarenaloside（3）、Boschanaloside（4）、Bosnarol（5）;3种苯乙醇苷类化合物:Crenatoside（6）,Verbascoside（7）,Isoverbascoside（8）。其中化合物（2）、（3）、（4）、（5）、（6）均首次在藏药甘肃马先蒿中发现。2.藏药甘肃马先蒿环烯醚萜苷及苯乙醇苷的最佳提取条件分别为8倍量的50%乙醇水溶液,提取1次,每次90 min;8倍量的50%乙醇水溶液,提取3次,每次90 min。产自青海西宁的甘肃马先蒿中Euphroside、Ixoroside、Plantarenaloside、Boschanaloside、Verbascoside、Isoverbascoside含量相对较高。3.藏药甘肃马先蒿水提物、苯乙醇苷及环烯醚萜苷对DPPH、ABTS、OH自由基的半数清除率IC50分别为210.3、52.1、260.3μg/m L,196.3、72.1、503.9μg/m L,87.1、73.1、95.6μg/m L,即苯乙醇苷部位体外抗氧化能力最强;苯乙醇苷部位能显著延长小鼠在常压密闭、Na NO2中毒及模拟10000m海拔急性缺氧存活时间（P<0.01或P<0.05）;苯乙醇苷部位可明显的延长小鼠力竭游泳时间（P<0.01）,降低LA含量,增加糖原、ATP含量,增强CK活性（P<0.01或P<0.05）。4.藏药甘肃马先蒿苯乙醇苷纯化工艺:最佳大孔树脂型号为D101,上样溶液质量浓度为20 mg/m L,上样流速为3 BV/h,先用3 BV的水除杂,再用5.0BV50%乙醇以2 BV/h的流速洗脱,洗脱液减压浓缩,冷冻干燥,得总苯乙醇苷纯化物,该纯化物中Verbascoside和Isoverbascoside的质量分数为42.29%和28.51%。5.藏药甘肃马先蒿苯乙醇苷各剂量组能显著的延长高原环境下小鼠力竭游泳时间,维持小鼠肝脏及骨骼肌组织的正常形态,降低高原环境及力竭游泳导致的RBC、HCT、WBC、HGB、MCH、MCHC的明显升高,显著降低LA、BUN、MDA的含量,增加PA、GSH及肝/肌糖原含量,增强MDH、SDH、PK、Na+K+-ATP、Ca2+Mg2+-ATP及SOD活性,减弱LDH活性（P<0.01或P<0.05）。结论1.该方法分析效果好,简单易行,可用于甘肃马先蒿中5种环烯醚萜类及3种苯乙醇苷类化合物的定性分析及快速制备。2.该提取工艺合理、稳定、可行。不同产地的藏药甘肃马先蒿环烯醚萜苷及苯乙醇苷含量存在一定的差异。3.藏药甘肃马先蒿苯乙醇苷类成分具有较强的抗氧化及抗缺氧活性,是一种有潜力的天然抗氧化及抗缺氧物质,也是甘肃马先蒿的抗运动疲劳活性组分。4.该方法高效快速、经济简单、易于实现,可用于藏药甘肃马先蒿中苯乙醇苷类成分的纯化。5.藏药甘肃马先蒿苯乙醇苷可通过稳定外周血象、维持组织正常生理结构、提高储能物质的利用率、避免能量代谢紊乱、增强氧化应激能力等多靶点有效的改善高原运动性疲劳。