华重楼拮抗内生细菌的筛选、鉴定及其拮抗物质的初步研究

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植物内生菌(endophyte)是指生长在健康植物组织、器官内部,不造成明显症状的正常微生物,并可以从经过表面消毒的植物内部分离得到。植物内生菌是一个十分丰富的类群,而抗菌内生菌作为其中的一类,能够产生很多新的抗菌活性物质,不但可以用于医疗上新药的研发,还可以用于农业植物病害的防治,但现阶段对植物抗菌内生菌的研究才刚刚开始,对其特性的认识还不够深入。传统的药用植物作为一类新的内生菌来源材料,正在成为内生菌研究者争相研究的对象。本文选择了药用植物华重楼(Paris polyphylla var. chinensis Franch)作为内生菌的分离材料,分离、筛选抗菌微生物,并对抑菌效果显著的内生菌进行了传统鉴定和分子鉴定,初步研究了抗菌物质的粗分条件及其相关性质。从药用植物华重楼(Paris polyphylla var. chinensis Franch)地下块茎中分离得到79株内生菌,初步分为7株真菌,3株放线菌和69株细菌。通过对细菌病原菌的初步抑菌筛选,得到了21株内生菌对一种或两种病原菌具有抑菌活性,进一步对植物病原菌进行了拮抗筛选,有13株内生细菌对一种或几种植物病原菌具有拮抗活性,其中5株内生细菌对试验的5种植物病原菌均有较好的抑菌活性,并选择了抑菌效果最好的内生细菌Iun35进行了以后的一系列研究工作。对菌株Iun35进行了形态学和生理生化特征的鉴定,确定该菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtitls),该菌对水稻稻瘟病菌( Pyricularia oryzae Cav. )、松赤枯病菌( Pestalotia funereal)、玉米纹枯病菌(Rhizoctonia solani Kuha)、玉米弯胞病菌[ Curvularia lunata (Walk) Boed ]、小麦赤霉病菌[Gibberelle zeae ( Schw. ) Petch ]菌丝生长的抑制率分别达到80.5%、71.9%、70.5%、83.3%、57.1%。菌株Iun35产生的抑菌物质可经(NH42SO4沉淀,其溶解液再经丙酮低温沉淀后,丙酮上清液经减压旋转蒸发后得到粗提液。粗提液的温度、pH稳定性及蛋白酶敏感性试验表明抑菌成分是一种相当稳定的物质。粗提液经透析袋(22mm ,14 000D)透析后,抑菌物质仍存在于透析袋内,说明其分子量不小于10kD。粗提液具有广泛的抑菌谱,对受试的玉米纹枯菌(Rhizoctonia cerealis)、油菜菌核病(Sclerotinia sclerotiorum)等13株病原菌都有明显的抑制效果,说明该菌在生物农药和抗生素生产中具有很好的应用前景。
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