蜜蜂美洲幼虫腐臭病（American foulbrood，AFB），简称美幼病，是目前主要侵害蜜蜂幼虫生长的细菌性病害之一。美幼病的病原体是幼虫芽孢杆菌（Paenibacillus Larvae），革兰氏染色呈阳性。该菌的芽孢具有7层结构包围，而一般细菌的芽孢具有4~5层结构包围。这种特殊的结构使幼虫芽孢杆菌的芽孢生命力特别顽强，对热刺激和化学消毒剂等都具有很强的抵抗力，在高温、干燥等恶劣环境下仍然可以保持很强的感染性，能存活35年之久。正是因为幼虫芽孢杆菌具有这种特殊结构的芽孢可以引起美洲幼虫腐臭病，而并非是其营养体的作用。在蜂群内传播方式包括水平传播和垂直传播，而在群间主要是通过垂直传播的方式。也因为传播方式的特殊性使其成为影响蜜蜂幼虫生长的主要疾病。该病多发生于夏、秋两季，轻者影响蜂群的繁殖和采集力，重者造成全群或全场蜂群覆灭。目前国内外关于美幼病病原体检测鉴定的报道还比较少，且大多集中于研究细菌分离、菌落形态观察、显微镜镜检、生化试验等检测方法。然而，由于芽孢在病虫或蜂蜜样品中的含量比较少，且有很多其他相近种类的细菌，使得分离鉴定的难度有所增加。但随着分子生物学的发展，PCR检测方法因其诊断快速、敏感性较高、特异性较强等特点，可用于快速应用于美洲幼虫腐臭病的诊断，尤其可针对蜂病的混合感染和蜂产品的质量检测更为有效。　　近几年来，养蜂业已成为吉林省延边朝鲜族自治州的特色牧业，随着蜜蜂养殖密度加大，蜜蜂各种疾病的发生也伴随而来，影响着养蜂业的发展。美洲幼虫腐臭病如今已成为严重威胁延边养蜂业发展的重要疫病之一，因此，分离幼虫芽孢杆菌本地株、建立患病蜜蜂和蜂产品检测方法的研究是十分必要的。　　本试验为了分离幼虫芽孢杆菌延边株，利用疑似患美幼病的病虫通过改良胡萝卜酵母琼脂培养基的分离培养，成功分离出特异性菌落；并利用革兰氏染色、孔雀石绿染色等方法镜检观察、H2O2试验、牛乳试验等细菌的生化特性进行生化鉴定，以及 PCR分子生物学方法进行初步鉴定。结果显示，革兰氏染色镜检可见清晰的革兰氏阳性杆形菌体。孔雀石绿染色镜检可见菌体为红色，芽孢为绿色。菌株在H2O2试验反应中没有气泡产生，牛乳试验结果表明加入菌体的新鲜牛奶出现凝结沉淀稍后又消失。PCR扩增显示该菌在1.0％琼脂糖凝胶电泳1474 bp左右有清晰条带，以上结果初步证明所分离的菌体为幼虫芽孢杆菌。　　根据分离的幼虫芽孢杆菌测序结果以及 GenBank发表的幼虫芽孢杆菌16S rRNA基因保守区（AB073204）设计合成一对特异性引物 AFBU和 AFBL，建立本地幼虫芽孢杆菌的PCR检测方法。结果表明，该方法可特异性扩增幼虫芽孢杆菌16S rRNA序列上大小为1353bp的片段，对蜜蜂败血杆菌、蜜蜂球囊菌、蜂房蜜蜂球菌的扩增结果均为阴性，具有良好的特异性；对倍比稀释的芽孢杆菌进行检测，其敏感性可达45CFU/mL的幼虫芽孢杆菌。将一定量的幼虫芽孢杆菌增添到蜂蜜、蜂胶和蜂王浆等蜂产品中进行检测结果说明，建立的PCR检测方法具有快速、准确、敏感、特异等优点，完全适用于疑似患病蜜蜂和蜂产品的检测。应用所建立的PCR检测方法对吉林省延边州8个县（市）饲养的39个养蜂场539份蜜蜂样本进行检测，延边地区平均感染率为17.63%。