论文部分内容阅读
目的:探讨生物钟基因Per1对细胞周期相关基因的调控作用,以及对人口腔鳞癌细胞SCC15增殖、凋亡、细胞周期和体内成瘤的影响。方法:构建3组针对Per1 RNA的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒重组质粒,转染SCC15细胞,用Western-blot及实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,QRT-PCR)检测筛选干扰效果最佳组为实验组,对照组(Control-shRNA)为对任何基因均无干扰效应的慢病毒质粒,空白组为未做任何处理的SCC15细胞。用QRT-PCR检测各组细胞中细胞周期相关基因p53、CyclinD1、CyclinE、CyclinA2、CyclinB1、CDK1、CDK2、CDK4、CDK6、p16、p21、Wee1、cdc25、E2F、Rb1 mRNA的表达;用流式细胞仪检测各组细胞增殖、凋亡和细胞周期分布;将实验组和空白组细胞分别接种于裸鼠背部皮下,观察成瘤情况。结果:成功构建了3组Per1-shRNA慢病毒质粒,通过QRT-PCR和Western-blot证明Per1-shRNA-I组沉默效果最佳,作为实验组。Per1-shRNA-I组细胞中CyclinD1、CyclinE、CyclinB1、CDK1和Wee1mRNA的表达水平较Control-shRNA和SCC15组显著增高(P<0.05),而p53、CyclinA2、p16、p21和cdc25 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05),Control-shRNA和SCC15组细胞中各基因mRNA的表达水平无差异(P>0.05),CDK2、CDK4、CDK6、E2F和Rb1 mRNA的表达水平在3组中均无显著改变(P>0.05);与Control-shRNA和SCC15组比较,Per1-shRNA-I组中细胞增殖指数显著增高(P<0.05),凋亡指数显著降低(P<0.05),S期的细胞数显著降低(P<0.05),G2/M期的细胞数显著增加(P<0.05),而Control-shRNA和SCC15组细胞的增殖指数、凋亡指数及细胞周期分布无差异(P>0.05);Per1-shRNA-I组细胞体内成瘤能力显著增强(P<0.05)。结论:生物钟基因Perl是重要的抑癌基因,Perl能调控下游众多的细胞周期基因,其表达变化影响细胞细胞周期进程、增殖和凋亡的平衡失调及体内成瘤能力,对Per1深入研究有可能进一步明确癌症的发生发展机制,为癌症的治疗提供新的有效分子靶点。