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目的:观察贵州两个产地的石楠藤药材提取物的抗凝血作用;建立石楠藤药材的显微鉴别、薄层鉴别、水分和灰分杂质检查及活性成分含量测定项;初步建立石楠藤药材的HPLC特征图谱。从药材外观性状到内在质量综合分析该药材的品质,充实贵州民族药的基础研究,为该药材的质量标准提升及其相关产品的质量控制提供科学依据。
方法:1、采用测定小鼠断尾出血时间(BT)、毛细管法测定凝血时间(CT)及复钙法测定血浆凝固时间(RT)。2、照《中国药典》2010版一部附录ⅥB薄层色谱法,对石楠藤药材中的活性成分海风藤酮进行薄层鉴别;照《中国药典》2010版一部附录ⅨH水分测定法(第一法),测定石楠藤药材水分含量;照《中国药典》2010版一部附录ⅨK灰分测定法,测定石楠藤药材的总灰分含量;照《中国药典》2010版一部附录XA中的醇溶性浸出物测定法,测定药材的乙醇浸出物含量;照《中国药典》2010版一部附录ⅥD高效液相色谱法,通过提取条件和色谱条件的优化,建立海风藤酮的含量测定方法,进行不同产地、不同采收期石楠藤药材中海风藤酮的含量测定分析;采用高效液相色谱法,通过提取条件和色谱条件的优化,构建石楠藤药材的HPLC特征图谱;照《中国药典》2010版一部附录XD挥发油测定法(甲法)提取挥发油,采用GC-MS法测定两个产地同一时间采集石楠藤药材的挥发油成分。3、通过药材显微结构结合HPLC特征图谱分析比较石楠藤药材及市场上常见混淆品之间的差异。
结果:1、70%乙醇、石油醚提取物等均具有明显延长小鼠BT的作用,70%乙醇提取后药渣的水提物、正丁醇萃取后剩余部分无明显延长小鼠BT的作用;70%乙醇、石油醚及水提取物均具有明显延长小鼠CT的作用;而所有提取物对小鼠RT均无明显影响。2、海风藤酮的薄层鉴别,以硅胶GF254为固定相,石油醚-丙酮(2∶1)为展开剂展开效果较好,供试品色谱中,在与对照品海风藤酮色谱相应的位置上,置紫外光灯(254nm)下显相同颜色的斑点。不同产地石楠藤药材中海风藤酮的含量有明显差异,以贵州金沙产药材的含量最高,贵州赤水产药材的含量最低;药材水分含量为4.9%~10.6%,总灰分含量7.2%~14.8%,乙醇浸出物含量为12.6%~21.2%;不同采收期药材中海风藤酮的含量,从花前期至花期迅速增加,在7月份时达到最高值,果期之后明显下降;测定的12批石楠藤样品中有12个特征峰,其相对保留时间的RSD为0.079%~1.1%,峰面积比值的RSD为149.30%~327.44%。3、从药材显微构造和HPLC特征图谱分析比较结果显示,石楠藤药材及市场上常见混淆品之间存在较明显的差异。
结论:1、石楠藤药材的提取物具有抗凝血作用,作用特点不同;正丁醇萃取后剩余部分有促凝血作用。2、建立了药材中海风藤酮的薄层鉴别法和含量测定方法,方法简便可行、重现性好、结果准确,为该药材的质量控制提供了实验依据;石楠藤药材中海风藤酮含量动态研究结果支持《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)中石楠藤药材质量标准制定的采收期,该药材生产在确定采收期时应结合质量和产量加以考虑,以夏季至秋季采收为最佳;建立了石楠藤药材的HPLC特征图谱,可较全面的反映该药材中所含化学成分的信息,结合药材显微结构观察能有效地区别石楠藤药材及市场上常见的混淆品。通过对石楠藤药材从药材外观性状到内在质量的综合评价,充实了贵州民族药的基础研究,为该药材的质量标准提升,保证用药安全、有效及质量可控提供了科学依据,有利于促进贵州省民族药相关科研基础工作及民族药的可持续发展。