暗黑鳃金龟(Holotrichia parallela),在我国分布广,种群数量大。通过研究暗黑鳃金龟幼虫肠道细菌多样性,可以为探讨肠道细菌对幼虫的生理功能和生态学意义奠定基础,为进一步了解暗黑鳃金龟幼虫与其共生菌的协同进化、物种进化途径提供新的认知,最终为防治其危害提供新思路。本研究通过利用16S rRNA基因序列分析和PCR-DGGE分析技术研究了暗黑鳃金龟幼虫不同龄期中、后肠和山东自然种群肠道细菌多样性。1从暗黑鳃金龟三种不同龄期的幼虫中肠肠道中分离到了35种不同细菌遗传型,分属于7个不同的细菌纲,分别是δ-变形菌纲(Deltaproteobacteria)、放线菌纲(Actinobacteria)、β-变形菌纲(Betaproteobacteria)、α-变形菌纲(Alphaproteobacteria)、γ-变形菌纲(Gammaproteobacteria)、梭菌纲(Clostridia)和拟杆菌纲(Bacteroidetes)。而且不论是在哪一个龄期,γ-变形菌纲和梭菌纲的细菌合起来都超过了总数的80%,是中肠肠道细菌的绝对优势细菌菌群。此外,在一龄幼虫肠道里,只有β-变形菌纲、δ-变形菌纲、γ-变形菌纲、梭菌纲和拟杆菌纲5个纲的细菌,到了二龄时,除了上述5个纲细菌外,还分离到了另外一个新的纲-放线菌纲的细菌,占中肠细菌总数的3.33%。到了三龄时,又分离到了α-变形菌纲的细菌,这说明随着幼虫龄期的增加,其体内细菌的种类和比例也在随着发生改变,其细菌种类的多样性也随之增加。2从暗黑鳃金龟三种不同龄期的幼虫后肠肠道中分离到了57种不同细菌遗传型,在分类上分别属于δ-变形菌纲、β-变形菌纲、α-变形菌纲、γ-变形菌纲、梭菌纲、拟杆菌纲、放线菌纲和芽孢杆菌纲(Bacilli),其中,α-变形菌纲的细菌在一龄幼虫后肠中没有检测到,到了二龄才开始出现,这也说明了幼虫肠道细菌多样性会随着龄期的增长而增加。此外,研究还发现,不论是在一龄,二龄还是三龄幼虫后肠内,梭菌纲细菌都是绝对的优势菌群,占了后肠细菌的很大一部分。其中有3种细菌在所有龄期的幼虫后肠都检测到了,占了梭菌纲细菌种类总数的16.7%,说明梭菌纲的细菌和暗黑鳃金龟幼虫的关系非常密切,在幼虫整个生活期内都存在于后肠内。3从暗黑鳃金龟山东自然种群中肠分离到24种不同细菌遗传型,从后肠分离出58种不同细菌遗传型,其中有9株菌在中、后肠内都存在,也就是说一共从山东自然种群内分离得到73种细菌遗传型,这充分说明了暗黑鳃金龟幼虫肠道细菌的多样性。比较中、后肠细菌的组成及种类,不难发现,后肠不仅细菌数目多于中肠,种类也更加丰富,分布的纲和目更加广泛。同时在中、后肠有9株菌能同时被检测到,说明这些相同的细菌在肠道的分布范围非常广泛,分布于肠道的各个部分;而中、后肠的大部分细菌都不相同,说明即使是在同一幼虫肠道的不同部分,其细菌组成也有各自独特的地方,并不一定完全相同。