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目的：构建生殖支原体（Mycoplasma genitalium，Mg）黏附蛋白MgPa的优势表位（1075～1364 aa）基因（MgPa′）的重组表达体，在大肠杆菌中进行诱导表达，纯化表达产物并进行免疫原性和免疫反应性分析，为探索MgPa重组蛋白在Mg血清学诊断中的应用价值和其生物学功能提供实验依据。 方法：通过生物信息学分析，筛选并挑选MgPa基因优势抗原表位，以Mg G-37标准株基因组DNA为模板，高保真聚合酶链反应扩增目的片段，将其亚克隆到原核表达载体pET-30a（+）中，构建重组质粒pET-30a（+）／MgPa′，然后转化至表达宿主菌E.coliRosettTM2（DE3）中进行诱导表达，利用SDS-PAGE和Western-Blot进行分析和鉴定表达产物；用Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白，BCA法测定纯化蛋白浓度。用纯化的MgPa重组蛋白（rMgPa′）免疫新西兰兔，间接ELISA方法检测免疫兔血清中MgPa′多克隆抗体的效价，对rMgPa′的免疫原性进行分析。同时用纯化的rMgPa′包被微孔板，建立间接ELISA方法，检测Mg感染者阳性血清及对照血清，根据重组蛋白与MS阴、阳性血清的反应情况，对rMgPa′的免疫反应性作出评价。 结果：Expasy软件分析MgPa基因的抗原表位选择了MgPa′基因的3223～4092bp位碱基序列为目的基因（MgPa′，片段长度为870bp，编码290个aa）；PCR扩增得到大小约为870bp的目的片段；构建的重组质粒经酶切鉴定和测序鉴定证明其中插入片段为MgPa′目的基因，测序结果与Genbank上登录序列完全一