第一部分 人胚胎耳廓软骨细胞体外培养及生物学特性的研究 目的:研究人胚胎耳廓软骨细胞体外培养的方法及培养细胞的生物学特性。 方法:取人胚胎耳廓软骨,分离培养软骨细胞,观察其形态学改变,Ⅱ型胶原抗体免疫组化进行细胞来源的鉴定,测定其生长曲线,RT-PCR检测Ⅱ型胶原和蛋白聚糖(Aggrecan)mRNA的表达。 结果:原代及早期传代细胞为多角形或三角形,随着代次的增加,细胞从多角形逐渐变为长梭形。到第6代时,几乎全部转变成梭形细胞。生长曲线表明,第1～4代细胞有旺盛的增殖力。Ⅱ型胶原抗体染色阳性。mRNA水平第1代和第2代Ⅱ型胶原表达较强,随传代表达逐渐减弱,第5代基本消失;第1代至第3代蛋白聚糖表达水平较高,随传代表达逐渐减弱,第6代基本消失。 结论:体外培养的第1至第4代人胚胎耳廓软骨细胞可做为耳软骨组织工程研究的种子细胞。 第二部分 不同年龄段人耳软骨细胞体外培养及生物学特性的研究 目的:观察年龄因素对体外培养的人耳软骨细胞生物学特性的影响。 方法:取不同年龄组人耳软骨,分离培养软骨细胞,观察其形态学改变,测定其细胞群体倍增时间,RT-PCR检测Ⅱ型胶原和蛋白聚糖mRNA的表达,进行比较。 结果:各年龄组人耳软骨细胞在细胞形态,细胞倍增时间,Ⅱ型胶原和蛋白聚糖mRNA的表达方面无明显差异。体外培养的人耳软骨细随着代次的增加,从多角形逐渐变为长梭形。到第5代时,几乎全部转变成梭形细胞。细胞倍增时间显示,第1～3代细胞有旺盛的增殖力。mRNA水平第1代和第2代Ⅱ型胶原含量及蛋白聚糖含量相对较高,第3代表达明显下降,第4代起两者