目的:卵巢上皮性癌(以下简称卵巢癌)是严重威胁女性健康的恶性肿瘤,在妇科恶性肿瘤中死亡率居于首位。目前卵巢癌治疗以手术和化疗为主,但由于卵巢癌早期诊断困难,晚期治疗效果差,术后易复发,为此建立新的、有效的防治措施势在必行。阿司匹林(aspirin)为非甾体抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drug, NSAID),其药理作用为抑制环氧化酶(cyclooxygenases,COXs)的活性,降低前列腺素(prostaglandians,PGs)的合成。近年来国内外研究发现,阿司匹林有一定的抗肿瘤作用,阿司匹林对体内致癌物诱发性肿瘤及移植性肿瘤、体外及流行病学研究均有肿瘤抑制作用。国外已将阿司匹林列为肿瘤化学预防剂。目前,关于阿司匹林抗卵巢癌的研究还很少,仅局限于其对体外培养的细胞系的增殖、凋亡等的影响;有关其作用机制的探讨较少,国内外有关阿司匹林治疗卵巢癌的研究鲜有报道。本研究采用体外培养的人卵巢癌细胞系SKOV3(卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株)制作裸鼠卵巢癌移植瘤模型,观察经阿司匹林处理后移植瘤内细胞凋亡及阿司匹林对环氧化酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2),血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF),肿瘤组织微血管密度(microvassel density, MVD)的作用,研究阿司匹林对COX-2的抑制作用与血管生长相关因子的关系,探讨其在卵巢癌防治中的作用机制。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,收集处于对数生长期的SKOV3细胞,建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型。将25只裸鼠随机分为5组,每组5只,造模后24小时给药,分别为(1)空白对照组:0.2 ml生理盐水每天灌胃;(2)低浓度阿斯匹林组:15mg/kg阿斯匹林灌胃每日一次;(3)高浓度阿斯匹林组:25mg/kg阿斯匹林灌胃每日一次;(4)阿斯匹林+环磷酰胺组(联合治疗组):25mg/kg阿斯匹林灌胃每日一次;环磷酰胺100mg/kg腹腔注射每周2次(自肿瘤接种后第8天);(5)环磷酰胺组:0.2 ml生理盐水每天灌胃;环磷酰胺腹腔注射每周2次(自肿瘤接种后第8天)。以上各组治疗连续3周。每3天测量1次皮下移植瘤体的大小,以公式V=πabc/6计算肿瘤体积(V为体积,a、b、c分别为移植瘤互相垂直的直径),绘制移植瘤的生长曲线。计算肿瘤生长抑制率,抑瘤率(%)=(a-b)/a×100% (a为对照组平均瘤重,b为药物组平均瘤重)。应用流式细胞仪检测各组移植瘤的凋亡率。HE染色观察各组移植瘤标本的形态。免疫组化SP法检测各组移植瘤组织中环氧化酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤组织微血管密度(MVD)的表达。结果: 1人卵巢癌SKOV3裸鼠皮下移植瘤生长曲线:与空白对照组相比,其余各治疗组均能抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,尤其以联合治疗组抑制肿瘤生长的作用最为明显。2各组皮下移植瘤的体积比较:空白对照组肿瘤体积大于其余各治疗组肿瘤体积,差异有统计学意义(P<0.01)。高浓度阿斯匹林组与低浓度组阿斯匹林组之间肿瘤体积相比,差异无统计学意义(P>0.05)。联合治疗组与环磷酰胺组之间肿瘤体积相比,差异无统计学意义(P>0.05)。3各组皮下移植瘤的瘤重及抑瘤率:空白对照组肿瘤瘤重大于各治疗组肿瘤瘤重,差异有统计学意义(P<0.01);高、低浓度阿斯匹林组间移植瘤的瘤重比较,差异有统计学意义(P<0.05);联合治疗组与环磷酰胺组移植瘤的瘤重比较,差异有统计学意义(P<0.05)。各治疗组对SKOV3皮下移植瘤的抑瘤率分别为:低浓度组阿斯匹林组48.82%、高浓度阿斯匹林组56.17%、联合治疗组81.63%、环磷酰胺组73.23%。4应用流式细胞仪检测各组移植瘤的凋亡率:各组SKOV3皮下移植瘤的凋亡率分别为:空白对照组7.95±1.45%、低浓度组阿斯匹林组9.73±1.38%、高浓度阿斯匹林组13.61±0.41%、联合治疗组25.86±2.19%、环磷酰胺组24.03±0.43%。各治疗组分别与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);高、低浓度阿斯匹林组移植瘤的细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。联合治疗组与环磷酰胺组移植瘤的细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。5 HE染色观察各组移植瘤标本的形态:空白对照组主要表现为低分化癌,癌细胞密集,细胞异型性明显,核大深染,染色质呈团块状,有明显核仁,胞浆丰富,可见较多核分裂像与微血管形成,间质极少,瘤细胞呈浸润生长。各治疗组移植瘤标本镜下均可见癌细胞的细胞核深染、固缩,细胞排列较稀疏,与空白对照组相比,可见大片红染无结构的坏死区,以阿司匹林与环磷酰胺联合治疗组的坏死面积最为明显,约为40%~50%。6免疫组化SP法检测各组移植瘤组织中环氧化酶-2(COX-2)的表达:空白对照组、低浓度阿斯匹林组、高浓度阿斯匹林组中COX-2的阳性表达率逐渐降低;环磷酰胺组对肿瘤组织COX-2蛋白的表达无明显抑制。7阿司匹林对SKOV-3移植瘤血管生成的影响:VEGF阳性表达主要定位胞浆,空白对照组、低浓度阿斯匹林组、高浓度阿斯匹林组、环磷酰胺组、联合治疗组中VEGF的阳性表达率逐渐降低。各组裸鼠皮下移植瘤MVD计数分别为:空白对照组19.4±2.9、低浓度组阿斯匹林组13.1±1.8、高浓度阿斯匹林组12.3±1.1、联合治疗组7.2±2.2、环磷酰胺组9.1±3.4。各治疗组分别与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);高浓度阿斯匹林组与低浓度组阿斯匹林组相比,差异无统计学意义(P>0.05);联合治疗组与环磷酰胺组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本研究显示阿司匹林能够抑制人卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤的生长并诱导其凋亡,具有一定的抗肿瘤作用。阿司匹林抗肿瘤机制可能是通过抑制COX-2的活性,下调VEGF的表达,从而抑制卵巢癌皮下移植瘤血管的生成,与化疗药物联合应用使阿司匹林的抑瘤作用增强。在卵巢癌的综合治疗中应用阿司匹林可能有助于促进细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成并提高肿瘤对化疗药物的敏感性。