【摘 要】
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目的:建立腺病毒载体介导的shRNA靶向沉默哮喘小鼠肺组织YKL-40的动物模型,探讨YKL-40 shRNA对哮喘小鼠气道嗜酸性粒细胞炎症的作用和对骨髓信号分子表达的调控。方法:将健康的C57BL/6小鼠,雌雄不限,SPF级别,6-8周,18-20g,随机分为生理盐水组（Na Cl组）、哮喘组（Asthma组）、腺病毒干扰YKL-40组（YKL-40 shRNA组）及阴性病毒对照组（Negati
【基金项目】
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国家自然科学基金（81570018）；
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目的:建立腺病毒载体介导的shRNA靶向沉默哮喘小鼠肺组织YKL-40的动物模型,探讨YKL-40 shRNA对哮喘小鼠气道嗜酸性粒细胞炎症的作用和对骨髓信号分子表达的调控。方法:将健康的C57BL/6小鼠,雌雄不限,SPF级别,6-8周,18-20g,随机分为生理盐水组（Na Cl组）、哮喘组（Asthma组）、腺病毒干扰YKL-40组（YKL-40 shRNA组）及阴性病毒对照组（Negative组）,每组8只。Asthma组、YKL-40 shRNA组和Negative组以卵白蛋白腹腔注射致敏3次及连续雾化激发7次构建哮喘小鼠模型,Na Cl组以生理盐水代替卵白蛋白。YKL-40 shRNA组和Negative组分别在激发前24小时气道注射携带YKL-40 shRNA干扰片段的腺病毒载体及阴性干扰片段腺病毒载体。于最后一次卵白蛋白雾化激发24小时后检测小鼠气道反应性、收集小鼠外周血、支气管肺泡灌洗液和肺组织。光学显微镜下计数支气管肺泡灌洗液中的白细胞总数,瑞氏吉姆萨染色计数支气管肺泡灌洗液中的嗜酸性粒细胞数;蛋白免疫印迹检测肺组织中YKL-40的蛋白表达水平;实时荧光定量PCR检测肺组织中的YKL-40、IL-5、eotaxin、GM-CSF核酸表达水平;酶联免疫吸附试验检测支气管肺泡灌洗液及血清中细胞因子表达水平;肺组织制作病理切片观察小鼠肺组织炎症细胞浸润及气道黏液分泌情况,组织病理半定量评分评估气道炎症细胞浸润程度及气道黏液分泌。结果:（1）与NaCl组相比,Asthma组和Negative组小鼠气道反应性明显增加,差异具有统计学意义（P<0.05）;YKL-40 shRNA组和Asthma组相比,气道反应性减轻（P<0.05）;Asthma组和Negative组相比较气道反应性无差异（P>0.05）。（2）与Na Cl组相比,Asthma组和Negative组支气管肺泡灌洗液中的白细胞数及嗜酸性粒细胞数均升高（P<0.05）;YKL-40 shRNA组和Asthma组相比,上述指标降低（P<0.05）;Negative组与Asthma组相比差异无统计学意义（P>0.05）。（3）与Na Cl组相比,Asthma组和Negative组小鼠肺组织中的YKL-40在m RNA和蛋白水平表达增高（P<0.05）;YKL-40shRNA组的YKL-40 m RNA和蛋白表达和Asthma组相比均减低（P<0.05）。（4）与Na Cl组小鼠相比,Astham组和Negative组肺组织IL-5、eotaxin和GM-CSF m RNA水平表达升高（P<0.05）;YKL-40shRNA和Asthma组相比上述指标表达减低（P<0.05）。（5）与Na Cl组相比,Asthma组和Negative组支气管肺泡灌洗液中的YKL-40、IL-5、eotaxin、IL-13和GM-CSF均升高（P<0.05）,且血清中的YKL-40和eotaxin水平升高（P<0.05）;YKL-40 shRNA组支气管肺泡灌洗液中的YKL-40、IL-5、eotaxin、IL-13和GM-CSF较Asthma组均减低（P<0.05）,且血清中的YKL-40和eotaxin水平明显减少（P<0.05）。（6）病理HE染色、PAS染色及组织病理半定量评分显示,与Na Cl组相比,Asthma组和Negative组小鼠肺组织气道周围炎症细胞浸润及气道黏液分泌明显（P<0.05）;YKL-40 shRNA组小鼠肺组织气道周围炎症细胞浸润及气道黏液分泌较Asthma组明显减轻（P<0.05）;Negative组和Asthma组相比无差异（P>0.05）。结论:（1）哮喘小鼠肺组织YKL-40存在高表达,YKL-40 shRNA可下调哮喘小鼠肺组织中YKL-40蛋白表达并减轻哮喘小鼠的气道炎症、气道高反应性和气道黏液分泌。（2）沉默YKL-40的表达可减轻哮喘嗜酸性粒细胞气道炎症以及调控骨髓信号分子的表达。
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