背景:纳米银（AgNPs）是应用纳米技术将银单质纳米化后形成的超微颗粒,具有较强的抗菌效果和广谱抗菌性。除了细菌,纳米银对霉菌、真菌、病毒及有害孢子的生长也会起到有效的抑制作用。近年来我国各地奶牛业发展迅猛,但饲养条件和管理水平相对落后,导致奶牛乳房炎阳性率居高不下,对奶牛生产和经济效益造成巨大危害。经试验,纳米银乳房注入剂对不同程度的临床型乳房炎和隐形乳房炎都有良好的疗效,表明纳米银在奶牛乳房炎的防治方面有很好的应用前景。但是,纳米银乳池给药或乳头浸润给药是否会对乳腺产生影响暂时不得而知。目的:研究纳米银对乳腺重要组成部分乳腺上皮细胞的细胞活力影响,进一步结合细胞自噬过程阐述其作用机制,为纳米银的安全应用提供科学依据。方法:以HC11小鼠乳腺上皮细胞为研究对象,运用化学发光法、LDH检测试剂盒检测纳米银细胞毒性,筛选纳米银适宜的作用浓度;再用透射电镜、荧光染色、Western Blot等方法检测纳米银作用下,HC11细胞细胞自噬的发生;再运用荧光染色、流式细胞术、ATP检测试剂盒、Western Blot等方法研究纳米银诱导HC11细胞自噬的分子机制。结果:1.纳米银对HC11细胞的细胞毒性研究与对照组相比,粒径小于100nm的浓度为25-100μg/mL纳米银作用24h细胞存活率极显著下降（p<0.01）,并呈现一定的剂量依赖性;浓度为6.25-100 μg/mL纳米银作用24h细胞上清液中LDH含量显著增多（p<0.05或p<0.01）,并呈现剂量依赖性。综合考虑选择12.5、25、50 μg/mL三种浓度进行后续试验。2.纳米银诱导HC11细胞自噬的研究通过透射电镜观察到纳米银处理组（50μg/mL）细胞表现出典型的自噬特征;与对照组相比,12.5、25、50 μg/mL纳米银处理组细胞,MDC荧光强度均明显增强;LC3-Ⅱ、Beclin蛋白表达均极显著增加（p<0.01）,P62蛋白表达均极显著减少（p<0.01）;Lyso Tracker溶酶体红色荧光强度明显增强。研究结果表明,纳米银处理诱导HC11细胞发生自噬。3.纳米银诱导HC11细胞自噬的分子机制研究与对照组相比,12.5、25、50μg/mL纳米银处理组细胞胞内发生ROS累积,50μg/mL纳米银处理组DCFH-DA荧光强度极显著增强（p<0.01）;进一步运用总ROS清除剂NAC能减少纳米银引起的HC11细胞ROS累积,LC3-11表达增多;HO-1、Bach1、Keap1和Nrf2总蛋白表达水平显著升高（p<0.05或p<0.01）,且呈剂量依赖性;线粒体膜电位显著降低,且呈剂量依赖性;细胞ATP含量极显著降低（p<0.01）;PINK1和Parkin总蛋白表达水平极显著升高（p<0.01）;Akt、p-AMPK、mTOR 蛋白表达水平极显著升高（p<0.01）,p-Akt、AMPK、p-mTOR蛋白表达水平显著降低（p<0.05或p<0.01）,且呈剂量依赖性。研究结果表明,纳米银作用诱导HC11细胞氧化应激,发生线粒体损伤,激活Akt/AMPK/mTOR信号通路,进而诱导自噬。结论:12.5、25、50 μg/mL的粒径小于100nm的纳米银颗粒可引起HC11小鼠乳腺上皮细胞细胞活力下降,启动细胞的自我保护机制——细胞自噬的发生;启动细胞自噬的分子机制为:纳米银刺激造成HC11细胞发生氧化应激,出现线粒体损伤,激活细胞内的Akt/AMPK/mTOR信号通路;提示粒径小于100nm的纳米银在一定浓度范围可能引起细胞毒性,临床可参考低于12.5 μg/mL的使用浓度。