东北红豆杉（Taxus Cuspidata）是世界上濒临灭绝的珍贵树种,被我国列为一级保护植物,其枝皮中含有一种萜类化合物——紫杉醇,具有明显的抗癌效果。因此合理利用东北红豆杉生产紫杉醇是我国近年来研究的热门课题。由于其枝皮中紫杉醇的含量很低,通过直接提取法、化学合成法、发酵法等均有一定的弊端,因此,利用悬浮细胞培养技术来高效生产紫杉醇具有重要的现实意义。本文主要以东北红豆杉半木质化的外植体幼茎作为试验材料,通过在愈伤组织培养基里添加一定量的5-ALA并结合不同的光照处理,得出最佳光环境条件下5-ALA的最适添加量。同时,对多次继代且生长良好的愈伤组织进行悬浮培养,探讨无机盐、促进剂及有机溶剂辅助超声波对悬浮细胞鲜重增殖及其紫杉醇生成总产量的影响,并进行合理的试验优化设计,得出不同物质的最适添加时间和添加量,为东北红豆杉悬浮细胞生产紫杉醇的工厂化生产提供一定的理论基础。研究结论如下:1.以东北红豆杉愈伤组织为试验材料,在改良后的B5培养基中添加不同浓度的5-ALA进行愈伤组织的继代培养,结果表明25 d为紫杉醇测定的最佳时期。光照强度为1000 Lux的红光、光周期为12 h/d是紫杉醇积累的最佳光环境条件;加入浓度为1μM的5-ALA会显著促进愈伤组织的生长和紫杉醇的积累,愈伤组织鲜重增殖倍数达2.335倍,紫杉醇含量为0.0353%。2.通过调节B5培养基中的无机盐离子浓度,试验得出适合于东北红豆杉悬浮细胞培养生产紫杉醇的无机盐浓度最优组合为:氨态氮:硝态氮=3:24（总氮浓度为27 mmol/L）,硫酸镁浓度300 mg/L、氯化钙浓度250 mg/L、磷酸二氢钾浓度80 mg/L,此时,悬浮细胞中紫杉醇含量达到最大值1.468 mg/L,为对照组的1.3倍。3.通过对东北红豆杉悬浮细胞一个周期内的细胞鲜重进行测定,试验得出悬浮细胞生长呈“S”型曲线。在东北红豆杉悬浮细胞培养过程中,对促进剂的添加时间进行了合理优化,试验结果表明:在第9 d加入2 mg/L赤霉素,在第12-13 d加入20 mg/L水杨酸,在18 d加入400 mg/L苯丙氨酸,在第18-19 d加入100μΜ/L茉莉酮酸甲酯,此时,单位体积培养液中紫杉醇含量达到最大值,为4.149 mg/L,相比对照提升了2.68倍。4.利用油酸作为两相耦合培养的有机溶剂,添加一定浓度蔗糖并辅助超声波提取试验,得出东北红豆杉悬浮细胞生长的最佳培养条件为:在培养初期添加油酸浓度为10%、蔗糖浓度为30 g/L,在悬浮培养一周时进行2 min超声波处理,培养后期补加10 g/L蔗糖,此时为最佳培养条件,紫杉醇含量为7.549 mg/L,相比对照提升了5倍。