紫薯花色苷提取纯化及其抗氧化活性研究

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紫薯(Ipomoea batatas L.)为旋花科番薯属,一年生植物,具有高产稳产、成本低廉等特点;紫薯中的花色苷具有抗氧化、抗突变、抑菌、降血压等生理功效,极具开发利用价值。本论文研究了紫薯花色苷提取工艺,并进行了两种树脂联合纯化工艺研究,最后初步分析了紫薯花色苷不同纯化产物的组成成分,并对各纯化产物的抗氧化活性进行了研究。研究结果如下:(1)响应面联合因子设计优化酸性乙醇提取紫薯花色苷最佳工艺参数为:乙醇60%,pH2.0,液料比40:1,时间84min,温度74℃;在此条件下,花色苷得率为419.529mg/100g。对紫薯粉重复提取三次,以三次提取总量为100%,三次得率占比分别是91.86%、6.40%和1.74%。据此选定紫薯花色苷提取次数为1次。(2)两种树脂联合纯化工艺分三步进行:首先,通过对AB-8树脂和聚酰胺树脂的静态吸附解吸研究得出,两种树脂均有吸附率大、解吸率高的特点,适合紫薯花色苷类成分纯化。两种树脂对花色苷的吸附属于多分子层吸附,静态吸附解吸条件为:吸附平衡时间为2h,解吸平衡时间为1h,吸附温度为30℃,用60%乙醇作为解吸液,40-C进行解吸。然后,考察了AB-8树脂纯化工艺。采用上样浓度4mg/mL的提取液以2mL/min进行动态吸附,上样量20BV,再以4BV的60%乙醇(pH3.0)进行解吸,可获得样品Mz,其色价为32.36,纯度45.30%。同时考察了聚酰胺树脂纯化工艺。采用上样浓度4rag/mL的提取液以1.5mL/min进行动态吸附,上样量14.4BV,再以4BV的60%乙醇(pH3.0)进行解吸,获得样品M3,其色价为41.67,纯度58.48%。最后,采用聚酰胺柱对M2进一步分离。以不同梯度的乙醇进行洗脱,得四种级分F1、F2、F3、F4,其色价与纯度较粗提物及一次纯化物均有显著提升,以F2回收效果为最佳,其色价为95.88,纯度84.24%。(3)对花色苷纯化的不同产物进行组分分析,发现AB-8树脂纯化物M2与聚酰胺树脂纯化物M3峰形相同但较粗提物M1峰形明显不同,两级纯化并以梯度乙醇洗脱得到的F1、F2、F3、F4经HPLC上样测定显示,所得图谱峰形各异,且出峰量较少,说明梯度洗脱能对花色苷进一步分离。(4)抗氧化活性研究表明,紫薯花色苷各纯化产物对DPPH自由基及羟基自由基均有良好的抑制作用。两级纯化产物抗氧化效果优于粗提物及一级纯化物,其中又以组分F2、F3抗氧化性能最佳。组分F2对DPPH自由基和OH·自由基清除能力的IC50分别为0.002mg/mL和0.057mg/mL。组分F3对DPPH自由基和OH·自由基清除能力的IC50值分别为0.003mg/mL和0.011mg/mL。均优于Vc对两种自由基清除的IC50值0.003mg/mL和0.066mg/mL。
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