论文部分内容阅读
临床上颅脑损伤合并视神经损伤的发生率较高，约为5％，约有50％的患者遗留有永久性视力损害。由于视神经是脑白质的延伸，损伤后缺乏神经修复和再生的能力，所以临床治疗视神经损伤颇为棘手。长期以来，对视神经损伤的治疗方案一直存有争议。保守观察，药物(主要是激素)治疗和手术治疗都是可选用的方法。但大组病例分析认为：激素治疗、手术减压和未经特殊治疗之间疗效无显著性差异。且有学者证明在手术组中，伤后不同时间手术，其疗效亦无显著性差异。况且有些药物的剂量、应用时间及副作用并未完全弄清，手术适应证和手术时机还存有争议。因此寻找促进神经修复与再生的有效手段，成为现代神经生物学领域的热点。神经干细胞(neural stem cells，NSCs)具有未分化特性，增殖和自我更新能力，分化产生中枢神经系统(central nerve system，CNS)主要类型细胞(神经元和神经胶质细胞)的多向分化潜能和修复损伤组织的能力。NSCs存在于哺乳动物胚胎和成体CNS的部分区域中。利用NSCs移植治疗某些神经系统疾病和损伤，已取得了成功。目前国际上有关NSCs移植治疗视神经损伤的研究报道极少，国内还无人涉及。本实验采用无血清培养基对16-18d胎鼠脑室区／脑室下区(Ventricular Zone／Subventricular Zone，VZ／SVZ)NSCs进行培养、增殖，鉴定后植入成年大鼠损伤的视神经鞘膜内，在视神经损伤后的不同时间点移入NSCs并在植入后的不同时间点观察损伤视神经超微结构和视传递功能的恢复情况。探讨了NSCs移植对视神经损伤的治疗效应。 方法 采用机械分离法分散16-18d胎鼠VZ／SVZ组织，用无血清培养基进行培养、增殖；用免疫细胞化学方法检测Nestin(神经上皮干细胞蛋白)阳性表达。应用钳夹法制作大鼠视神经损伤模型。实验动物共分为三大组：Ⅰ组：阴性对照组，视神经损伤后不施加任何影响因素；Ⅱ组：阳性对照组，伤后局部注射碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)800Au，分为3个亚组：ⅡA组(伤后立即注射bFGF)，ⅡB组(伤后1wk注射bFGF)和ⅡC组(伤后4wk注射bFGF)；Ⅲ组：治疗组，视神经损郑州大学2004届硕士研究生毕业论文神经干细胞移植治疗大鼠视神经损伤的实验研究伤后局部注射NSCslxl护个，亦分为3个亚组:nIA组(伤后立即注射NSCs)，IllB组 (伤后iwk注射NsCs)和xxxe组(伤后4wk注射NSCs)。所有实验动物均在术后lwk和4wk制作损伤视神经电镜标本，观察超微结构改变，同时检测闪光视觉诱发电位(nash-visual evoked potential，F一vEP)的变化。 结果①体外培养的细胞生长状态良好，且Nestin表达阳性。②视神经超微结构变化:正常视神经结构清晰，轴突排列有序，髓鞘板层致密清晰;急性损伤视神经轴突和髓鞘两部分变化明显:轴突排列紊乱，肿胀扩大，髓鞘变薄，厚度不均，局部有破碎缺损，以粗纤维变化最为明显。阴性对照组(l组)上述改变进一步加重，lwk时部分轴突降解消失，残留的腔隙出现少量纤维组织，髓鞘进一步变薄，板层分离现象多见;4wk时，轴突变得透明空虚，胶质纤维填充腔隙，髓鞘变成薄膜样结构，并可见到泡状分离和碎屑。阳性对照组(n组):IIA组lwk时，轴突呈现大小不一的空泡样变性，部分降解遗留有残腔，髓鞘变薄，结构疏松;4wk时轴突仍有节断性变性崩解，残腔有胶质纤维填充，髓鞘仍可见局部缺损和板层分离;nB组lwk时，轴突数目稍有增多，仍可见部分轴突变性降解后遗留的残腔，髓鞘厚薄不均;4wk时残腔已被胶质增生物填充，其余变化不大;Ilc组lwk时，轴突数目稍有增多，髓鞘有所增厚，结构仍疏松;4wk时轴突微丝微管增多，部分轴突变性降解后的腔隙由胶质纤维填充，髓鞘板层结构有所修复。NSCs移植组(m组):nIA组lwk时，轴突数目开始增多，髓鞘结构仍疏松，局部有板层分离和崩解破损，许多新生小轴突外绕着薄层髓鞘;‘4Wk时，轴突内己发生变性坏死的区域，由大量胶质纤维填充，部分髓鞘进一步变性;mB组lwk时，轴突数目有所增加，部分轴突变性坏死遗留有小腔隙，有胶质纤维填充，髓鞘还未见明显修复，可见所生的小轴突，外绕以厚髓鞘;4wk时上述情况有好转，轴突数目进一步增加，微丝微管排列较整齐，髓鞘修复，但不完整，坏死区已形成胶质修复;mc组lwk时轴突数目明显增多，微丝微管数目也增多，排列较整齐，髓鞘有修复，仍不完整，坏死区己被胶质纤维填充;4wk时轴突和髓鞘进一步修复，轴突数目明显增多，微丝微管数目亦明显增多，分布较均匀，排列较整齐，髓鞘大部修复，板层结构清晰，未修复部位由胶质纤维填充。③F一vEP变化:大鼠正常眼F-vEP波形潜伏期短，振幅陡直;视神经急性损伤后波形低而宽;分组治疗后，n组F一vEP波形低缓，nl组波形较正常平缓，I组无波形诱出。④F一vEP各指标比较:视神经急性损伤后，损伤眼F，vEP各指标与自身健眼相比均有显著性差异切<0 .01)。NScs三亚组lwk和4wk时，损伤眼各指标与自身健眼相比，亦均有显著性差异切<0 .01或p、0.05)。Nscs三亚组lwk各指标(以左、右眼郑州大学2004届硕士研究生毕业论文神经干细胞移植治疗大鼠视神经损伤的实验研究差值为统计量)与急性损伤组比较: