丹参酮ⅡA对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化影响的实验研究

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目的研究丹参酮ⅡA (TanshinoneⅡA,TanⅡA)对体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化能力的影响。方法体外提取并扩增传代至第3代的SD大鼠BMSCs向成骨诱导分化培养,分为实验组(分别加入5×10-2μg/ml、5×10-3μg/ml、5×10-4μg/ml Tan ⅡA的含10%FBS的DMEM/F12)和对照组(单纯含10%FBS的DMEM/F12),采用MTT比色法检测细胞的增殖能力;采用RT-PCR方法检测碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原(COLL-Ⅰ)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、Runx2成骨相关细胞因子mRNA的表达;通过HE染色和钙结节染色对比观察细胞形态学情况。结果1、实验组各浓度Tan ⅡA较对照组BMSCs增殖速度均明显提高(P<0.05),细胞增殖速率随Tan IIA浓度的增高而加快,Tan ⅡA浓度为5×10-2μg/ml的实验组较其它两种浓度实验组BMSCs增值速率差异具有统计学意义(P<0.05)。2、实验组各浓度Tan ⅡA作用下的BMSCs的碱性磷酸酶(ALP)、I型胶原(COLL-I)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、Runx2成骨相关细胞因子mRNA的表达较对照组显著提高(P<0.05);3、第96h HE染色实验组与对照组比较可发现,实验组BMSCs密度更大,呈现典型的的编织状,对照组BMSCs相对稀疏。4、钙结节茜素红染色观察含Tan ⅡA实验组组均阳性显色,对照组显色不明显。结论Tan ⅡA能够显著提高体外培养的BMSCs增殖速率,对BMSCs向成骨细胞分化有明确的诱导作用,缩短骨细胞的成熟时间。
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