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目的翼状胬肉作为眼表常见疾病之一,可引起局部刺激症状、视力下降等多种不适。手术切除为当前最主要的治疗方式,但是术后复发率高。对于翼状胬肉发生及发展的病理机制虽有多种解释,但至今尚未明确。MicroRNAs是一类高度保守的单链非编码RNA分子,作为近年来的研究热点,其在翼状胬肉中的研究也日益受到重视。本研究的目的是探讨microRNA-218-5p(miR-218-5p)在翼状胬肉中是否表达,以及其与表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)在翼状胬肉中的表达关系,验证miR-218-5p能否成为治疗翼状胬肉新的靶点,进一步明确翼状胬肉的发病机制,旨在为翼状胬肉的治疗奠定实验学基础。方法1.组织学水平:搜集临床上人翼状胬肉组织及正常结膜组织,通过qRT-PCR以及Western Blot分别检测miR-218-5p及EGFR在翼状胬肉和正常结膜组织中的表达差异。并通过相关性分析,探讨miR-218-5p和EGFR的表达相关性。2.细胞学水平:用组织块培养法培养原代人翼状胬肉上皮细胞(human Pterygium Epithelial Cells,hPECs),通过抗角蛋白抗体免疫荧光染色鉴定确认为上皮细胞,并传代培养,第3-5代用于后续研究。向培养的原代人翼状胬肉上皮细胞转染miR-218-5p mimics及inhibitor干预miR-218-5p的表达,通过划痕实验探究miR-218-5p的表达水平变化对翼状胬肉上皮细胞迁移的影响;并通过qRT-PCR以及Western Blot检测miR-218-5p的表达水平改变对EGFR表达的影响。3.双荧光素酶基因报告分析:确认EGFR是否为miR-218-5p的下游靶目标。结果1.与人正常结膜组织(n=9)对比,发现在核酸及蛋白水平,翼状胬肉组织(n=24)中EGFR的表达均增加(P<0.05),而miR-218-5p的表达则降低(P<0.05);通过相关性分析发现miR-218-5p及EGFR在翼状胬肉中的表达呈明显负相关(R2=0.9062,P<0.01)。2.利用组织块培养法成功培养出原代人翼状胬肉上皮细胞,并成功进行了传代培养,经免疫荧光染色鉴定排除结膜下成纤维细胞的影响,确认为纯化的翼状胬肉上皮细胞。3.成功向培养的人翼状胬肉上皮细胞转染miR-218-5p mimics,mimics-NC,inhibitor,inhibitor-NC从而干预细胞中miR-218-5p的表达变化。通过qRT-PCR及Western Blotting检测发现:在人翼状胬肉上皮细胞中,转染miR-218-5p mimics上调miR-218-5p的表达,明显减少EGFR的表达(P<0.05);细胞中转染miR-218-5p inhibitor可以下调miR-218-5p的表达,明显增加EGFR的表达(P<0.05)。4.通过划痕实验发现转染miR-218-5p mimics后会使细胞的迁移明显减慢(P<0.05);而转染miR-218-5p inhibitor后细胞的迁移则显著增快(P<0.05)。5.双荧光素酶基因报告分析:说明EGFR是miR-218-5p的下游靶目标。结论本课题首次阐述了在翼状胬肉中miR-218-5p与EGFR的表达呈负相关;在细胞学水平发现miR-218-5p可通过抑制EGFR的表达抑制人翼状胬肉上皮细胞的迁移;实验验证EGFR是miR-218-5p的下游靶目标。实验揭示miR-218-5p参与翼状胬肉的发病过程,miR-218-5p可能成为翼状胬肉治疗的新靶点,为翼状胬肉临床研究提供新的实验依据,也为眼部新生血管疾病的发病机制研究提供新的线索。