目的:对人ApoM基因定点诱变，构建ApoM野生型和突变型原核、真核表达载体，并检测其生物学功能。　　方法: Trizol法抽提肝L02细胞总RNA，RT-PCR扩增ApoM全长基因，将基因片断重组到PMD18-T质粒中构建PMD18-T-ApoM重组质粒载体，转化到大肠埃希菌 JM109后筛选阳性克隆，提取质粒酶切和测序鉴定。采用sited-directed mutagenesis试剂盒对ApoM基因进行体外定点诱变，DNA测序鉴定定点诱变成功与否。用双酶切方法分别将ApoM野生型和突变型基因定向连接到原核表达载体pGEX-KG和真核表达载体pEGFP-N3中，构建野生型和突变型原核表达质粒 pGEX-KG-ApoM和真核表达质粒 pEGFP-N3-ApoM，分别转化到大肠埃希菌DH5α内，提取质粒酶切鉴定和测序鉴定。将构建的原核表达质粒pGEX-KG-ApoM转化大肠埃希菌DE3(BL21)，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示，野生型原核表达质粒pGEX-KG-ApoM能高效表达ApoM融合蛋白。将构建的野生型和突变型真核表达质粒pEGFP-N3-ApoM瞬时转染入7402细胞中，利用western blot技术检测转染后的7402细胞ApoM蛋白表达水平，利用3H标记的胆固醇体外利用实验、THP-1细胞参与的胆固醇流出实验以及CuSO4参与抗氧化实验检测野生型和突变型ApoM蛋白生物学功能间差异。结果成功克隆 ApoM全长基因并构建野生型和突变型ApoM原核、真核表达载体。Western blot结果显示，野生型原核表达质粒能高效表达ApoM融合蛋白。转染真核野生型ApoM重组质粒的7402细胞用WB检测，ApoM蛋白表达水平增强，而转染空载体组、空脂质体组、和突变型ApoM真核表达质粒组的ApoM蛋白表达水平均较低。在THP-1细胞参与的胆固醇流出实验中，与空载体组、空脂质体组、和ApoM突变载体组比较，野生型载体组具有明显的促进胆固醇从泡沫细胞中流出的作用，差异具有显著性（P＜0.05）；ApoM突变型载体组、空载体组和空脂质体组之间，差异无统计学意义（P＞0.05）。在 CuSO4参与的抗氧化实验中，　　结果:显示，ApoM野生型真核表达质粒表达的蛋白与ApoM突变型真核表达质粒表达的蛋白相比，前者的抗氧化能力明显的强于后者而突变型组，差异具有显著性（P＜0.05）；ApoM突变型重组质粒、空载体组和空脂质体组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。　　结论:通过 RT-PCR、定点诱变及基因重组技术成功构建野生型和突变型重组表达质粒。通过转化实验，野生型原核表达质粒能高效表达ApoM融合蛋白。瞬时转染 ApoM野生型真核表达质粒后的7402细胞可以有效地高表达ApoM蛋白，而ApoM突变型真核表达质粒组的ApoM蛋白表达水平均较低。在胆固醇流出和抗氧化实验中，野生型重组体组具有明显的促进胆固醇从由THP-1细胞转化的泡沫细胞中流出和抗氧化作用而ApoM突变型重组体组的这些功能明显减弱或丧失，为进一步研究ApoM在脂质代谢、在CHD发生发展中的作用奠定了基础。