本论文以转基因羊乳为原料进行了纯化EPO的工艺研制,取得了一定成果.首先,对rhEPO转基因母山羊进行了催乳表达,并监测泌乳量,进行体内、体外EPO生物活性的分析.结果显示:两只母山羊为高表达的转基因山羊.对其中一只高表达的山羊跟踪监测显示:活性表达曲线波动不大,平均为16852IU/ml;泌乳量大,诱导泌乳量平均55ml/天,优于CHO表达系统.其次,建立了两种用于转基因羊乳中rhEPO分离纯化的方法.Ⅰ,设计出一套完整快速的纯化方案,包括预处理(脱脂和调pH至4.6离心除去酪蛋白)、离子交换、疏水层析和分子筛层析.该方法用于转基因羊乳中rhEPO的纯化,活性回收率为10.1%,样品纯度用SDS-PAGE测定为一条带.Ⅱ,建立了免疫亲和层析纯化转基因羊乳中rhEPO的方法,包括成功制备和纯化抗rhEPO的单克隆抗体(获得了两株能稳定分泌抗rhEPO的单克隆抗体,亚型分别为IgGl和IgG2b),取其中一株纯化后的抗体与CNBr活化的Sepharose 4B偶联制备了免疫亲和柱,用于纯化转基因羊乳中的rhEPO.此外,对通过不同纯化路线获得的纯品rhEPO不但进行了生物活性(体内、体外)和唾液酸含量测定等性质鉴定,还进行了包括分子量、等电点、N-端测序等的分析.本研究获得的成果不仅对利用乳腺生物反应器生产药用蛋白具有指导意义,而且将大大推动利用转基因山羊乳生产药用rhEPO的产业化进程,带来巨大的经济效益.