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目的:观察不同剂量外源性神经节苷脂(GM-1)对新生大鼠海马神经干细胞增殖和分化的影响。
方法:从新生大鼠海马组织分离出神经干细胞,培养于含有EGF(20ng/mL)和bFGF(20ng/mL)神经干细胞培养液中,传代二次后进行分组实验。实验共分五组:(1)对照组仅是神经干细胞基础培养液,(2)低剂量GM-1组GM-1(0.3μg/ml)+神经干细胞基础培养液,(3)高低剂量GM-1组GM-1(30μg/ml)+神经干细胞基础培养液,(4)bFGF组bFGF(20ng/mL)+神经干细胞基础培养液,(5)bFGF/GM-1组GM-1(30μg/ml)+bFGF(20ng/mL)+神经干细胞基础培养液。将神经干细胞分别在各组培养液中悬浮培养并贴壁培养诱导分化。采用神经干细胞球直接计数和绘制生长曲线的方法测定细胞的增殖能力,应用免疫细胞化学技术对神经干细胞分化情况进行鉴定并经统计学处理对各组培养液中形成MAP-2及GFAP的阳性细胞率加以比较。
结果:空白组,低剂量GM-1组神经干细胞生长曲线随培养天数的增加而降低。高剂量GM-1组bFGF组及GM-1/bFGF组神经干细胞生长曲线随培养天数的增加而升高,形成细胞球的数量多,直径大,尤以GM-1/bFGF组最为明显。空白组,低剂量GM-1组及高剂量GM-1组形成MAP-2及GFAP的阳性细胞少;bFGF组,GM-1/bFGF组培养液中形成MAP-2及GFAP的阳性细胞较多,经统计学处理GM-1/bFGF组与bFGF组,高剂量GM-1组细胞球数量相比有显著差异;GM-1/bFGF组与bFGF组MAP-2的阳性细胞率没有明显差异而GFAP的阳性细胞率明显高于bFGF组。
结论:一定浓度的外源性GM-1对新生大鼠海马神经干细胞的增殖起促进作用;对神经干细胞无明显的诱导分化作用;可以增强bFGF对神经干细胞的增殖及分化的作用。