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目的:脑膜癌病(Leptomeningeal carcinomatosis,LC)是原发肿瘤细胞转移,局灶或弥漫浸润软脑膜及蛛网膜下腔,并播散至脑脊液,是恶性肿瘤中枢神经系统转移的一种较少见类型,原发病灶常为肺癌,腺癌是常见的组织学类型。近年来,脑膜癌病的发病率呈上升趋势,而目前该病的治疗效果尚不理想,尚缺乏针对原发肿瘤不同来源及病理特征的有效治疗手段。为进一步探索相关治疗靶点,以及评估相关治疗药物及方法的有效性及安全性,首先需要建立稳定的实验动物模型。目前脑膜癌病动物模型的研究报道较少,国外研究者较早通过小脑延髓池(Cisterna magna,CM)穿刺进行的脑膜癌病大鼠模型的实验性研究及鞘内给药方式需要较复杂的操作过程。本实验通过对早期脑膜癌病动物模型的实验方法进行改进,旨在建立操作简单、重复性较好的脑膜癌病小鼠模型,并进一步探讨模型小鼠脑膜肿瘤中血小板-内皮细胞粘附分子(Platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD31)的表达情况。方法:1小鼠小脑延髓池注射法雌性6-8周龄C57BL/6小鼠35只,其中20只随机分为对照组和实验组,每组10只,分别经小脑延髓池穿刺注射PBS或Lewis肺癌细胞(Lewis Lung carcinoma cell,LLC)悬液(1.5×105个细胞)7.5μl,观察评估小脑延髓池注射后两组小鼠体重随时间变化及神经系统症状表现;15只随机分为正常对照组(n=3)、PBS组(n=6)和模型组(n=6),当小鼠症状表现明显时,4%多聚甲醛灌流固定取材,小鼠脑和脊髓组织用于组织病理学苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)及免疫组化分析。2石蜡切片HE染色法4%多聚甲醛固定后的小鼠脑和脊髓组织标本经脱水、透明、浸蜡、包埋后制成蜡块,用Leica RM2235石蜡切片机切片,切片厚度为5μm。切片经脱蜡后进行常规HE染色,组织病理学观察软脑(脊)膜病理改变。3免疫组织化学法采用免疫组化方法对模型组及PBS组小鼠桥脑部位的软脑膜进行CD31染色分析,评估脑膜癌病血管生成。结果:1小鼠经小脑延髓池缓慢注射10μl稀释的墨汁溶液后,解剖小鼠脑及脊髓,可见墨汁溶液主要分布于小脑延髓池、腹侧脑池。2小脑延髓池注射LLC细胞或PBS后两组小鼠行为学观察(1)小脑延髓池注射前对照组小鼠体重为(18.68±1.08)g,实验组小鼠体重为(19.43±0.86)g,两组比较差异无统计学意义(P=0.101)。小脑延髓池注射PBS或LLC细胞悬液后第1天,两组小鼠体重均下降明显,对照组小鼠体重为(17.02±1.63)g,实验组小鼠体重为(17.08±1.06)g,两组比较差异无统计学意义(P=0.921)。第2~3天,两组小鼠体重水平仍较低,较前变化不大。第4~10天,两组小鼠体重均缓慢回升,差异无统计学意义(P﹥0.05)。第11天开始,对照组小鼠体重仍在逐渐增加,而实验组小鼠体重开始进行性下降直至死亡,两组比较差异有统计学意义(P=0.029)。实验组小鼠均在40天内死亡,中位生存时间为32.5天,而对照组小鼠均至观察终点40天仍存活,差异具有统计学意义(P﹤0.0001)。(2)实验组小鼠小脑延髓池注射LLC细胞后症状出现在第10~16天,平均为(13±2)天。全部实验组(n=10)小鼠均表现为活动明显减少,全身状态差(10/10);其中6只小鼠病程中出现了弓背姿势(6/10);5只小鼠出现步态不稳(5/10);2只小鼠出现拎起尾巴旋转的表现(2/10)。而对照组小鼠均活动正常,未出现上述异常表现。3苏木精-伊红染色显示模型组小鼠症状表现明显时其脑与脊髓软膜组织病理可见肿瘤细胞浸润,以脑基底部及脊髓颈段多见。4免疫组化结果显示CD31在模型组及PBS组小鼠桥脑部位软脑膜的表达明显不同,实验组血管计数约为(12.83±3.01)mm-1,对照组为(6.08±1.02)mm-1,差异具有统计学意义(P=0.021)。结论:1通过小脑延髓池注射Lewis肺癌细胞可成功建立肺癌脑膜癌病小鼠模型,实验方法简单、重复性较好。2脑膜癌病模型小鼠病程中可出现体重进行性下降、活动明显较少、全身状态差、弓背姿势、步态不稳、拎起尾巴时旋转等异常症状表现,但各小鼠表现不尽相同。3脑膜癌病模型小鼠的软脑膜部位CD31的表达明显增多,表明脑膜血管密度增多,提示新生微血管形成可能在脑膜癌病发展中起重要作用。