藏猪源猪链球菌病流行病学调查与病原生物学特性研究

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西藏自治区在以往推进高原特色产业发展的基础上,结合脱贫攻坚,把藏猪产业列为我区高原特色七大重点产业之一,为促进西藏农牧业提质增效,促进农牧民增收致富上起着关键性作用。而猪链球菌病一直是严重危害养猪业的重要疾病,但目前我区对该病的报道还只停留在细菌的分离鉴定和流行病学调查,对该病原在我区的流行血清型与其所携带的毒力基因和耐药基因还未见报道。本研究为掌握猪链球菌在藏猪群中的流行情况以及病原菌的生物学特性,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对1679份藏猪血清进行猪链球菌抗体的检测,并用聚合酶链式反应(PCR)方法对采集的327份藏猪病料(肺脏及扁桃体)进行猪链球菌病原的分离鉴定,并对分离株进行荚膜血清分型、毒力基因检测、耐药基因检测、耐药性分析以及病理学实验观察。本研究共分为3部分:1.在采集的1679份藏猪血清中共检出902份为猪链球菌抗体阳性,总阳性率为53.72%。其中拉萨、林芝、日喀则、山南、昌都5个地市阳性率分别为51.84%、61.92%、55.23%、19.23%、48.90%,其中林芝市抗体阳性率最高,山南市抗体阳性率最低;藏公猪和藏母猪血清抗体阳性率分别为51.58%和55.93%。用SPSS 13.0软件进行统计分析表明,猪链球菌抗体检出率在地区和性别这两个因素上不存在显著性差异(P≥0.05)。2.对采集的327份藏猪病料进行细菌的分离培养、生化鉴定、PCR检测及序列分析,共分离到17株藏猪源猪链球菌,分离率为5.2%。分离菌基因序列与南京、华中、湖南农业大学猪链球菌分离株同源性均在98%以上。根据其荚膜抗原的差异,对17株分离菌进行血清分型鉴定,鉴定结果为,其中5株为猪链球菌2型、1株为猪链球菌7型、7株为猪链球菌9型、4株为猪链球菌16型。分别占29.41%、5.88%、41.18%、23.53%。上述结果表明,藏猪群中存在多种血清型猪链球菌,而且分离菌的4种血清型均有较强的致病性,因此在平时的预防和治疗中应采取针对性措施。依据猪链球菌6种常见毒力基因(gdh、fbps、epf、mrp、orf2、sly)合成引物,用PCR方法扩增17株分离菌的毒力基因,检测结果为:gdh检出率为100%,fbps检出率为100%,epf检出率为88.24%,mrp检出率为70.59%,orf2检出率为64.71%,sly检出率为70.59%。此次毒力基因检测共检出9种基因型,其中以gdh+epf+sly+fbps+mrp+orf2+为主要基因型。3.选取30种临床常用抗生素,对17株分离菌进行耐药性分析,结果显示,西藏地区猪链球菌分离株对多种抗生素耐药。尤其对丁胺卡那、复方新诺明和多粘菌素耐药严重,分别为88.24%、94.12%、100%。对苯唑西林、庆大霉素、新霉素耐药趋势明显。对17株藏猪源猪链球菌大环内酯类耐药基因(erm A、erm B、ermC、erm TR、mef A、mef E、msr D)进行扩增,检出率分别为23.53%、41.18%、70.59%、52.94%、64.71%、35.29%、41.18%,其中ermC的检出率最高。
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