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本研究将替米考星(TMS)和乳酸甲氧苄啶(TMPL)配伍,以纳米乳为载体,通过伪三元相图筛选并优化处方,制备了复方替米考星纳米乳(TMS-TMPL-NE)。并对其稳定性、安全性、及有效性进行了考察,为TMS-TMPL-NE在兽医临床上的应用提供理论依据。1. TMS-TMPL-NE分析方法的建立利用紫外-可见分光光度计,分别建立了纳米乳中TMS和TMPL含量检测的分析方法。结果显示:TMS和TMPL的标准曲线分别在5～50μg·mL-1和1～30μg·mL-1浓度范围内线性关系良好;平均回收率为(99.18±1.89)%和(99.68±2.23)%,相对标准偏差(RSD)为1.91%和2.24%;日内精密度(RSD)为0.62%和0.65%,日间精密度(RSD)为1.32%和1.42%。建立的TMS-TMPL-NE分析方法回收率、重复性和精密度均满足要求,可为其制备及稳定性考察提供专属性好的含量测定方法。2. TMS-TMPL-NE的制备及其质量评价采用伪三元相图,对纳米乳形成的因素进行考察,初步筛选出制备TMS-TMPL-NE的处方;利用Kirby-Baueer试验,筛选出TMS和TMPL两药之间最佳配比,确定制备TMS-TMPL-NE最终处方;采用离心法和染色法,鉴别其结构类型;利用透射电镜和激光粒度分析仪,考察其形态和粒径分布;通过强光照射试验、加速试验和长期试验测定其稳定性。TMS-TMPL-NE的最终处方为:w(吐温80) =24.93%,w(无水乙醇/PG)=16.62%,w(磷酸)=1.5%,w(IPM)=4.57%,w(TMS)=5.98%,w(TMPL)=0.66%,w(蒸馏水)=45.74%;制备的TMS-TMPL-NE为水包油(O/W)型纳米乳;棕黄色,透明均一;透射电镜下乳滴呈球形,分布均匀,平均粒径为12.4 nm,多分散系数为0.051;制剂稳定性良好,有效期为20个月。结果表明制备的TMS-TMPL-NE质量稳定,达到了临床用药要求。3. TMS-TMPL-NE的安全性评价通过急性毒性试验和皮肤刺激性试验,对TMS-TMPL-NE进行安全性评价。结果显示:TMS-TMPL-NE的半数致死量(LD50)为2346 mg.kg-1,LD50的95%可信限为:2270～2425 mg.kg-1,属于低毒级药物;TMS-TMPL-NE对完整皮肤和破损皮肤均无明显刺激性。表明TMS-TMPL-NE口服给药比较安全、乳房灌注给药刺激性小。4. TMS-TMPL-NE体外联合抑菌效应研究为了检测复方替米考星的体外联合抑菌效应,通过单药最小抑菌浓度(MIC)测定、联合药敏试验和Kirby-Baueer,研究TMS-TMPL-NE对3种临床菌株的体外联合抑菌效应。TMS和TMPL联用时表现协同抑菌作用;二者联用时对金黄色葡萄球菌的MIC分别是单用时的1/4和1/8倍,对无乳链球菌的MIC均是单用时的1/4倍,对大肠杆菌的MIC分别是1/4和1/16倍;二者联用对3种病原菌的部分抑菌浓度指数(FIC)均不大于0.5;TMS-TMPL-NE对3种病原菌的抑菌直径与对照组相比,差异显著(P<0.05),与其他组相比差异极显著(P<0.01)。结果表明TMS-TMPL-NE对3种病原菌的体外联合抑菌性强。5. TMS-TMPL-NE的临床治疗试验对自然感染慢性呼吸道疾病的鸡分别自由饮水高、中、低剂量的TMS-TMPL-NE进行治疗,并与对照组药物泰克星比较。高、中、低3个剂量组的治愈率分别为98%、88%和72%,有效率分别为100%、98%和89%;泰克星组治愈率为74%,有效率为91%。表明高、中剂量的TMS-TMPL-NE对鸡慢性呼吸道疾病的治疗效果均显著优于低剂量TMS-TMPL-NE和泰克星组(P<0.05)。因此在临床治疗鸡慢性呼吸道疾病的推荐剂量为中剂量,对于重症病例,可以适当提高用药量。制备的TMS-TMPL-NE安全性高、药效强、稳定性好,将为兽医临床用药提供一种新型纳米级抗菌药物。