紫杉醇(Paclitaxel,PTX)是目前治疗肿瘤的一线抗癌药物,临床广泛使用的制剂采用聚氧乙烯蓖麻油增溶,其水溶液不稳定,且依赖进口、价格昂贵、毒副反应严重。因此PTX的替代载体研究在国际上受到极大关注,国内也有研究及替代制剂上市,但尚存在增溶作用不稳定、制备复杂不可控、安全性不明确、无主动靶向性等问题,走向实际临床依然面临诸多“瓶颈”,因此有必要开发具有完全自主知识产权、制备简单、使用安全,并具有靶向性的PTX新载体。　　 本文基于嵌段聚合物可在水溶液中自组装形成胶束的理论基础,构建一种与肿瘤靶向治疗密切相关连有抗体药物与PTX的纳米药物,有望解决PTX替代载体研究的系列关键技术问题,并拥有完全自主知识产权。本项研究有望对PTX的临床使用价值及肿瘤的治疗产生积极的提高和推动作用,对于其他类似难溶性药物靶向载体载体研究也可提供借鉴。　　 本文主要内容包括:具备活性分子链末端基团的三嵌段聚合物聚氧乙烯—聚氧丙烯.聚氧乙烯(PEO-PPO-PEO,Pluronic)P123的合成与表征;可靶向治疗肿瘤的PTX纳米药物的制备及表征;可用于纳米药物载体靶向性评价的量子点的制备及表征;具主动靶向性的PTX纳米药物体外肿瘤靶向性评价;具主动靶向性的PTX纳米药物的细胞毒作用研究;石墨烯纳米材料对肿瘤细胞的细胞毒作用研究。　　 本研究以紫杉醇为模型药物,基于紫杉醇Pluronic P123聚合物胶束载体的现有研究基础,考虑到修饰产物的生物体靶向载药用途,因此修饰产物中避免引入新基团或新分子,过程尽量简化,同时修饰产物经过一定纯化处理。对此开展如下研究:针对Pluronic P123聚合物聚氧乙烯链端羟基,确保不引入新基团,制备Pluronic P123聚合物的羧基化衍生物;采用醚沉淀技术手段对修饰产物进行纯化处理;对材料修饰及纯化各步骤中间产物进行鉴定,对合成产物的理化性质进行表征。　　 紫杉醇不耐高温,所以纳米药物的制备过程应尽量温和,单克隆抗体为蛋白,因此靶分子连接过程应避免pH值、温度等条件剧烈变化,同时纳米药物应低温储存。对此开展以下研究:利用以上研究得到的合成产物,在室温条件下,制备载有紫杉醇的羧基化Pluronic P123嵌段聚合物胶束;在室温条件下,使用活化剂对聚合物结构中的羧基进行活化,使胶束与抗HIF-1α单克隆抗体分子相连接;制备纳米药物冻干制剂,考察冻干制剂的复溶性,利用现代分析手段,对纳米药物的冻干制剂及复溶溶液进行表征。　　 体外靶向评价,应能客观反应紫杉醇Pluronic P123聚合物免疫胶束特异性靶向癌细胞的过程,需要选择合适的示踪剂,提供抗HIF-1α单克隆抗体分子与药物协同杀伤癌细胞的直观证据。对此开展如下研究:纳米药物抗体体外寻靶活性检测,内容包括细胞ELISA法检测载药聚合物胶束表面抗体的寻靶活性,以无抗体载药聚合物胶束为对照;细胞ELISA法可通过酶标仪450nm吸光度变化分析抗体寻靶活性,细胞ELISA法还可通过显微镜直接观察,分析抗体寻靶活性。　　 量子点(QDs)作为一种半导体纳米微晶粒,其特殊的物理结构及尺寸使其具有荧光强度高,发光时间长,光化学稳定性好,不易被组织自发荧光掩盖及可多指标同时检测等特性,但可于温和条件下制备的水溶性QDs无法直接用于疏水性药物的药物载体的靶向性研究中。对此开展以下研究:于低温条件下制备不同粒径的水溶性QDs,在相对温和条件下对该QDs进行转相,使其可用于疏水性药物载体的靶向性荧光示踪研究,对该合成过程进行表征。　　 基于以上研究,使用疏水性QDs为荧光示踪剂,代替紫杉醇制备可靶向癌细胞的QDs:Pluronic P123嵌段聚合物胶束,以不含抗体的量子点聚合物胶束为对照,考察了该靶向纳米药物载体特异性靶向肿瘤细胞的能力。　　 为评价紫杉醇纳米药物对肿瘤细胞的细胞毒作用,及安全性方面的变化。开展如下研究:采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)比较该靶向性纳米药物对MGC-803肿瘤细胞及人正常成纤维细胞(HDF)的细胞毒性作用,以统计检验差异是否显著为指标;分析纳米药物是否产生新的肿瘤治疗机理,及新的通路。　　 最后,通过对本文研究工作进行归纳和总结,提出抗肿瘤药物胶束给药载体靶向性研究的新思路。　　 随着纳米技术与纳米材料的深入研究,人们对纳米材料可能产生的生物效应与安全性问题引起了担忧。本文通过MTT法及细胞TEM法对氧化石墨烯(Graphite Oxide,GO)纳米材料的细胞毒性进行了初步评价,为该纳米材料的生物医学应用提供参考。