论文部分内容阅读
目的模仿骨软骨解剖结构利用制备分层脱钙骨基质(LDBM)“双相”一体化支架;探讨藻酸凝胶作为细胞载体制备“软骨细胞-LDBM支架”复合体植入兔关节软骨缺损的修复效果。方法1.LDBM三维多孔支架的制备及特性研究牛股骨干骺端松质骨柱(直径4mm,高度10mm)经脱脂、联合脱细胞化学处理后,将骨柱下半部分包埋于骨蜡中进行分层脱钙,脱蜡后制得松质骨LDBM一体化支架。体外对支架进行大体、扫描电镜观察和组织学染色,并检测支架细胞毒性、降解率及力学特性。体外分离培养的兔软骨细胞利用藻酸钙凝胶,与制备好的LDBM支架复合培养,利用扫描电镜观察细胞在支架上的黏附情况,CCK-8法测定支架对软骨细胞生长增殖的影响。2.“软骨细胞-LDBM支架”复合体修复软骨缺损将LDBM浸泡到藻酸纳与软骨细胞的混悬液,滴加氯化钙溶液构建“软骨细胞-LDBM支架”复合体。本实验中选用健康新西兰大白兔24只,制造双侧膝关节软骨缺损后随机分为三组:复合体组、单纯LDBM组及空白对照组。复合体组植入“软骨细胞-LDBM支架”复合体,单纯LDBM组植入LDBM支架,空白对照组旷置处理。术后分别3、6月取材行大体、组织学及免疫组化染色观察,并进行病理评分。3.统计分析数据采用SPSS17软件处理,实验数据均用平均值±标准差表示,采用单因素方差分析和LSD检验分析评分结果,观察复合体组与单纯LDBM组及空白对照组统计学是否有差异,P<0.05,有统计学意义。结果1、LDBM支架呈疏松多孔结构,脱钙部分与未脱钙部分过渡自然,界限明显。SEM观察LDBM支架保留原有的骨管腔系统,孔径分布均匀,材料内部空隙间交通状况良好,交界区连接完整,未见断裂现象。MTT实验结果是支架无细胞毒性,体外复合软骨细胞培养,SEM和CCK-8结果示细胞黏附增殖能力良好。2、术后6月复合体组呈透明样软骨组织修复,表面光滑,与周围软骨及软骨下骨整合良好,单纯LDBM组仅有少量软骨组织样修复,表面较平整,而空白对照组部分纤维样组织修复,凹陷较为明显。大体及Wakitani评分结果显示:各时间点复合体组评分均优于LDBM组和对照组,各组间间均具有统计学差异,即复合体组修复效果优于单纯LDBM组和空白对照组,单纯LDBM组优于空白对照组;复合体3月与6月点评分间也有统计学差异;即6月时修复效果优于3月。结论经脱脂、联合脱细胞和分层脱钙制备的“双相”LDBM一体化支架,具有良好的细胞相容性和力学特性,脱钙层复合二级支架藻酸凝胶作为细胞载体,体外构建构建“软骨细胞-LDBM支架”复合体,可以有效的修复兔膝关节骨软骨缺损,为骨软骨组织工程复合体修复软骨损伤提供新的实验基础和依据。。