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共轭亚油酸(Conjugated linileic acid, CLA)是目前公认的具有抗氧化、抗癌、减肥降脂、调节免疫力等多种生理功能的健康营养品,已广泛应用于饲料、食品、医药等多个领域,目前已成为研究的热点。许多微生物体内都含有亚油酸异构酶(linoleic acid isomerase, LAI),它可将亚油酸(linoleic acid, LA)催化生成CLA,其中,植物乳杆菌和德式乳杆菌的转化效率最高。植物乳杆菌P-8是源自内蒙古乌拉特中旗的优良发酵菌种,经研究表明该菌具有降血脂和改善胃肠道微生物群落结构等特性,并且可高效产生CLA。因此,对植物乳杆菌P-8亚油酸异构酶基因结构的研究与改造具有重要的理论和实用价值。基因敲除技术是研究基因功能的方法之一,能精确定点的修饰和改造目的基因,而且经改造的基因片段能随着基因组的复制而稳定遗传,目前已广泛应用于各类生物的研究。文章利用同源重组基因敲除技术原理,构建了植物乳杆菌P-8lai的敲除载体,并对外源质粒电转化植物乳杆菌P-8的条件进行研究,为lai的敲除奠定了基础。根据GenBank中注册登记的lai序列,设计合成多对引物,经过多次PCR扩增得到lai-up和lai-down两同源臂片段,并成功克隆到pMD19-T载体上。将扩增得到的kan抗性基因也构建到pMD19-T载体上。利用限制性内切酶将lai-up、lai-down和kan分别从pMD19-T载体上切下并成功构建到pUC18载体上,最终得到的同源重组敲除载体,命名为pUC18△lai。经研究表明,质粒pMG36e电转化植物乳杆菌P-8的最佳电转化条件为：菌体在3%甘氨酸处理培养4h后,经2kV电压电击,最后接种于含0.4mol/L蔗糖的复苏培养基中。